摘要婴幼儿消化生理功能尚未发育成熟,断奶或食物的改变常引起肠道免疫应激和功能紊乱,致使消化吸收不良,导致生长发育迟缓。大豆寡糖来源丰富、无有害残留,且具有明显的益生素作用,但对其调节肠道微生态和免疫功能的作用了解不多。由于仔猪断奶时期的生理特点与婴幼儿非常接近,本研究以断奶环江香猪作为试验动物,通过体内、体外试验分析大豆寡糖对肠道微生态及免疫功能的调节作用,并探讨其机制,为改善婴幼儿的营养供给提供新思路,同时为大豆寡糖的综合开发利用提供理论依据。<br> 1.大豆寡糖对小肠形态与营养物质代谢的影响:选用体重为3.19 kg左右的21日龄断奶环江香猪,随机分成2组加以不同处理,每个处理6个重复,单栏饲养,分别饲喂基础日粮(对照组)和添加大豆寡糖的基础日粮(大豆寡糖组),自由采食和饮水,试验期为14d。记录每天的采食量,分别于试验开始和结束时称取空腹体重并采集血液,肝素抗凝,离心分离血浆,测定生化参数和游离氨基酸的浓度;采血后,按常规方法进行屠宰,采集小肠组织,测定基因表达、并观察组织形态;再选用10头环江香猪,随机分为2组,处理同前。预试期4d,正试期3d,收集粪样,指示剂法测定粗蛋白和粗脂肪的表观消化率。结果表明,与对照组相比,大豆寡糖组仔猪生长性能无显著变化(P>0.05);血浆甘油三酯、尿素氮和血氨浓度显著下降(P<0.05),总蛋白浓度显著升高(P<0.05);血浆甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、精氨酸和蛋氨酸的浓度均显著升高(P<0.05);空肠SGLT1、GLUT2 mRNA的表达量显著高于回肠(P<0.05),并显著高于对照组(P<0.05);小肠绒毛高度与隐窝深度之比显著升高(P<0.05);大豆寡糖组仔猪粗蛋白和粗脂肪的表观消化率均有提高趋势(P>0.05)。<br> 2.大豆寡糖对肠道微生物区系及其代谢产物的影响:收集空肠、回肠、盲肠和结肠内容物,测定断奶环江香猪肠道微生物区系、肠道内容物中部分细菌数量变化及其代谢产物的含量。结果表明,大豆寡糖组仔猪回肠和结肠内容物中微生物的多样性增加,其中双歧杆菌、短双歧杆菌、罗氏菌属和产丁酸菌(梭杆菌属)等有益菌群的数量及其代谢产物丙酸、丁酸等短链脂肪酸的含量均显著增加(P<0.05),大肠杆菌、梭菌属和链球菌等有害细菌的数量及异丁酸、异戊酸和氨等蛋白质分解代谢产物显著减少(P<0.05)。<br> 然后进行体外发酵试验,厌氧收集环江香猪的空肠、回肠、盲肠和结肠内容物作为接种物,分别以0(对照组)、0.5%、1.0%、2.0%、5.0%、8.0%大豆寡糖(大豆寡糖组)、2.0%葡萄糖(葡萄糖组)为底物体外发酵。于接种后0、1、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、30、36和48 h记录产气量,用产气动力学方程分析大豆寡糖的发酵特性,并于发酵48 h结束后检测发酵液pH值、NH3-N和短链脂肪酸的浓度以及微生物区系。结果表明:各添加剂量的大豆寡糖组最大理论产气量和产气速率均显著高于对照组、显著低于葡萄糖组(P<0.05),接种回肠内容物的大豆寡糖组产气速率显著低于葡萄糖组,但在结肠内容物发酵液中却显著高于葡萄糖组(P<0.05),接种结肠和盲肠内容物的大豆寡糖组和葡萄糖组的体外发酵延滞产气时间均显著低于对照组(P<0.05);各肠段内容物的大豆寡糖组发酵液pH值、NH3-N浓度均低于、短链脂肪酸浓度均高于对照组,其中乙酸浓度随大豆寡糖添加剂量的增加呈减少趋势、丙酸和丁酸浓度呈增加趋势,2.0%大豆寡糖组结肠发酵液中丁酸浓度最高;随着大豆寡糖添加量的增加,肠道微生物区系与有益细菌数量先增加再减少,而有害细菌数量呈先减少后增加的趋势。<br> 3.大豆寡糖对免疫功能与肠道紧密连接的影响:测定血浆中免疫球蛋白和细胞因子的浓度;采集脾脏、回肠和结肠组织,分析免疫相关基因和肠道紧密连接基因的mRNA表达。结果表明:大豆寡糖增加了血浆免疫球蛋白IgG和IL-10的浓度,减少了血浆中IL-1β的浓度(P<0.05);脾脏、回肠和结肠TNF-α、IL-1β和IL-8 mRNA以及TLR2-NF-κB mRNA的表达降低,结肠和脾脏中IL-10 mRNA的表达显著升高(P<0.05);回肠和结肠紧密连接蛋白ZO-1 mRNA的表达水平显著提高(P<0.05)。<br> 综上所述,大豆寡糖可显著增加肠道微生态的多样性,提高肠道有益菌的数量、抑制有害菌的增殖,从而减少了蛋白质在大肠中的分解代谢;改善肠道形态结构,调节免疫功能,增强肠黏膜屏障功能,促进了营养物质的代谢。
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