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摘要目的:<br>　　 1.研究Notch1胞内段NICD(Notch1 Intracellular Domain)在不同分化程度胃癌组织中的差异性表达。<br>　　 2.研究外源性NICD过表达对胃癌细胞株AGS的增殖、转移以及化疗敏感性的影响。<br>　　 方法:<br>　　 1.收集温州医学院附属第一医院2012年胃癌手术标本共12例。其中男性9例，女性3例，平均年龄66.25±11.86岁，其中高分化腺癌3例、中分化腺癌3例，低分化腺癌3例及未分化腺癌3例。所有患者术前均未接受放疗和化疗。另取同期门诊胃镜室行活检术取得的正常胃组织12例，其中男9例，女3例，平均年龄62.8±5.1岁。所有病例均获得伦理审查委员会机构的伦理批准。所有标本均保存于液氮中。采用Western Blotting法检测不同胃组织季正常胃组织中NICD的相对表达量。<br>　　 2.用阳离子脂质体lipofectamine2000将携带有NICD胞内段的真核表达质粒(pIERS2-EGFP-NICD)转入AGS细胞，并将转入空质粒的AGS细胞作为阴性对照组，AGS细胞作为空白组。转染24小时后，采用500μg/ml G418进行稳定筛选，筛选二十天后半量(250μg/ml)维持培养。<br>　　 3.采用实时荧光定量PCR法检测三组细胞Notch1信号通路相关基因的表达。采用Western blot检测三组细胞NICD蛋白表达。<br>　　 4.采用CCK8法检测三组细胞的细胞增殖，Transwell实验检测三组细胞的侵袭能力，顺铂(DDP)、氟尿嘧啶（5-FU）检测外源性NICD过表达对胃癌细胞化疗敏感性的影响。<br>　　 5.统计学方法:采用SPSS15.0统计学软件进行分析，实验结果采用均数加减标准差，显著性采用单因素方差分析及t检验(P＜0.05)。<br>　　 结果:<br>　　 1.胃癌组织中，随着分化程度的降低，NICD的表达逐渐升高（图1A），正常胃粘膜组织NICD相对表达量为0.20±0.01;高分化胃癌组织NICD相对表达量为0.50±0.03;中分化胃癌组织NICD相对表达量为0.61±0.03;低分化胃癌组织NICD相对表达量为0.73±0.10;未分化胃癌组织NICD相对表达量为0.90±0.17(图1B)。胃癌组较正常组表达量有统计学差异(p＜0.05, t=9.439)。<br>　　 2.转染后荧光显微镜下观察，实验组细胞及阴性对照组细胞均带有绿色荧光，空白对照组则无荧光。<br>　　 3.实时荧光定量PCR检测，与阴性对照组细胞、空白对照组细胞相比较，实验组细胞下游基因Hes1、NF-κ B2mRNA表达明显增加，而JAG1、notch1基因则无明显变化。Western blot证实实验组细胞NICD蛋白表达量明显增加。<br>　　 4.实验组细胞同对照组细胞相比，增殖率明显升高;Transwell实验表明，实验组细胞穿过transwell小室数58.8±7.4，阴性对照组细胞22.6±3.17，空白对照组细胞23±2.86。实验组细胞迁移能力高于对照组(P＜0.05)。DDP，5-FU分三个浓度抑制细胞生长，实验组抑制率明显低于阴性对照组和空白对照组。<br>　　 结论:<br>　　 NICD在不同分化的胃癌组织中均有表达，且随着分化程度的降低，NICD的表达增加。表达外源性NICD能够促进胃癌细胞AGS的增殖和侵袭能力，降低肿瘤药物对化疗的敏感性。