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摘要冠心病是人类最主要的死亡原因之一，也是消耗巨大医疗资源的疾病之一。血脂代谢异常和高血压是冠心病发生的主要危险因素。年龄、性别、饮食、吸烟、药物以及心理应激等均与冠心病的发生发展相关。除了众多的环境因素以外，冠心病还是一种多基因相关疾病，有40％-60％的冠心病可以从遗传学的角度得到有效的解释。因此，冠心病是遗传和环境因素共同作用的结果。遗传物质具有相对稳定性，研究冠心病的遗传易感基因对于开展针对性的人群预防，延缓或防止冠心病的发生具有重要意义。经皮冠状动脉介入治疗(PCI)是冠心病治疗的重大进展之一，术后接受阿司匹林和氯吡格雷双联（简称双抗）抗血小板治疗也已成为冠心病患者PCI术后抗血小板的常规治疗方法，对改善PC1术患者预后发挥了重要作用。但双抗抗血小板治疗临床疗效具有个体差异性，治疗效果不佳严重时可直接导致死亡。遗传药理学的研究发现，编码药物代谢酶、转运体以及靶受体的基因多态性是药物产生个体差异的主要原因。<br>　　 对氧磷酶1(PON1)是肝脏内重要的酶之一，既参与了人体的血脂代谢，与冠心病易感性密切相关;又参与了肝脏对多种药物的代谢反应，其中包括用于PCI术后患者抗血小板治疗的阿司匹林和（或）氯吡格雷。在遗传学研究中，PON1启动子区-108C/T，外显子Q192R和L55M均曾被报道与冠心病的发生发展相关。近几年的文献还证明，这些位点的突变可能与行PCI术治疗的冠心病患者在双抗抗血小板治疗时的临床疗效相关。表观遗传学的研究证实，基因启动子区CpGiDNA甲基化影响基因的转录过程。PON1上游存在典型的CpGi，GC含量高达71.3％，CpG二核苷酸的出现率也高达0.74，且包含着转录因子Sp1及其他与转录相关的因子的结合序列。我们推断，该CpGi DNA甲基化可能与PON1转录表达相关。因此，本实验拟在中国南方汉族人中，一方面从遗传学角度揭示PON1多态性与冠心病发生发展的相关性，并探讨其与双抗抗血小板治疗临床效应的相关性;另一方面从表观遗传学角度初步探讨PON1启动子CpG岛DNA甲基化与双抗抗血小板治疗临床效应的相关性。<br>　　 方法及结果:<br>　　 1.采用PCR-Sequencing方法对538例无血缘关系的冠心病患者及与之同时期收录的539例健康对照者进行PON1-SNPs(-108C/T,-126C/G,-162A/G以及L55M,Q192R)分型，数据采用逻辑回归及单倍体分析方法。结果显示:对年龄、性别等因素进行校正后，PON1-126C/G仍表现出与冠心病发生的相关性(adjustedp=0.0127);单倍型分析结果也显示PON1-126C携带者具有发生冠心病的高风险(p＜0.05);男性、年长、高血压、糖尿病是冠心病发生的危险因素(p＜0.05)。<br>　　 2.对538名行PCI术并使用双抗抗血小板治疗的冠心病患者随访一年，统计患者术后主要不良心脏事件(MACE)及出血事件发生情况。结合基因分型情况，对数据进行逻辑回归及单倍型分析。结果显示:对年龄、性别、合并症、合并用药等因素进行校正后，Q192R(A/G)突变者PCI术后一年内发生MACE的风险是未突变者的1.60倍(adjusted p=0.0487)，但出血发生风险为未突变者的0.61倍(adjusted p=0.0066);L55M(A/T)突变后患者出血发生风险是未突变者的2.96倍(adjusted p=0.0209);-126C与出血高风险相关(OR=1.68，p=0.017)，单倍型分析也显示相同的结果;合并高血压、糖尿病是MACE发生的危险因素，糖尿病也是术后出血的危险因素(p＜0.05)。<br>　　 3.根据538名PCI术患者的随访结果，随机选择了29例一年内出现MACE的患者（MACE组）、32例6月内出血的患者（出血组）及28例一年内预后良好的患者（对照组）。采用重亚硫酸盐转化-测序方法(BSP-direct sequencing)检测PON1启动子区CpGi的DNA甲基化。结果显示:PCI术后双抗抗血小板治疗的患者中，一年内发生MACE的患者，DNA甲基化水平较高，但无统计学差异(p＞0.05);而6个月内出现出血事件的患者，DNA甲基化水平明显较低(p＜0.05)。该CpGi DNA甲基化的差异主要体现在PON1-183、-169、-162、-160、-141五个CpG位点上。<br>　　 4.对初步筛选的5个CpG位点，采用焦磷酸测序(Pyrosequencing)的技术，定量检测该区段的DNA甲基化率。最终纳入486名患者，其中有41人一年内发生MACE，61人6月内出现了出血事件。数据采用逻辑回归分析方法。结果显示:对年龄、性别、合并症等因素进行校正后，PON1-160甲基化率低仍是患者术后6月内出血的危险因素，当甲基化率每增加一个单位时，出血的风险减少2.2％(p＜0.0001)。PON1-160甲基化与PON1-108C/T变异在对患者出血发生风险的影响上存在交互作用(p＜0.0001)。<br>　　 结论:<br>　　 1.PON1-126C与冠心病发生高风险相关;男性、年长、高血压、糖尿病是冠心病发生的危险因素。<br>　　 2.PON1-126C/G、Q192R和L55M与双抗抗血小板临床效应显著相关。Q192R突变等位基因G可以增加患者术后发生MACE的风险，但可降低发生出血事件的风险;PON1-126C/G、L55M变异会增加患者术后6月内出血的风险。<br>　　 3.PON1启动子CpGi DNA甲基化率在PCI术后一年内发生MACE的患者中较高，而在6月内出现出血事件的患者中较低。<br>　　 4.PON1-160C低甲基化是患者术后6月内出血的危险因素，且与启动子-108C/T变异存在交互作用。