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摘要目的：<br>　　日本血吸虫病是由日本血吸虫（Schistosoma japonicum，Sj）引起的一种危害人体健康的地方性人兽共患寄生虫病。由于该病危害大，因此研发有效的疫苗防治该病已是势在必行。本研究拟构建Sj重组两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum，Bb)(pGEX-Sj26GST-Sj32)疫苗，并研究其免疫BALB/c小鼠后免疫应答的动态变化，以期为Sj的免疫预防提供一条新途径。<br>　　方法：<br>　　从我室保存的BL21(DE3)(pET28α-Sj26GST-Sj32)重组菌中抽提质粒pET28α-Sj26GST-Sj32，PCR扩增Sj26GST-Sj32融合基因，将该融合基因定向克隆到大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT中，构建重组质粒pGEX-Sj26GST-Sj32。将该重组质粒转化至大肠埃希菌BL21感受态细胞中，抽提质粒并进行双酶切，鉴定载体片段及目的基因片段长度。用电穿孔法将重组质粒pGEX-Sj26GST-Sj32转化至Bb，构建Bb(pGEX-Sj26GST-Sj32)疫苗，抽提质粒进行PCR鉴定。将重组质粒转化大肠埃希菌BL21，经IPTG诱导后以SDS-PAGE及Western-blot对表达产物进行鉴定。<br>　　将96只BALB/c小鼠随机分为2组，每组48只，用重组Bb(pGEX-Sj26GST-Sj32)疫苗分别经口服灌胃和鼻腔粘膜两种途径免疫小鼠，在免疫后0～22周每两周两组分别剖杀4只小鼠，分离血清，ELISA法测定血清抗体及细胞因子;取脾并分离脾细胞，用Sj成虫抗原（SjAWA抗原）和刀豆蛋白A(ConA)刺激培养，四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测免疫小鼠脾细胞增殖反应，同时设原液组对照;用流式细胞术(FCM)检测免疫小鼠脾CD4+和CD8+T细胞亚群的百分比;脾细胞经SjAWA抗原及ConA刺激培养，收集培养的上清液，双抗体夹心ELISA法检测脾细胞培养上清液的IL-10及IL-12水平，设原液组(stock group)作为对照;脾细胞经ConA培养，流式细胞仪检测脾细胞的凋亡发生率，并设原液组作为对照。<br>　　结果：<br>　　PCR成功扩增出长度为1991 bp的Sj26GST-Sj32融合基因;双酶切证实Sj26GST-Sj32融合基因成功插入质粒pGEX-1λT中;PCR证实从重组Bb(pGEX-Sj26GST-Sj32)疫苗中扩增出1991 bp的Sj26GST-Sj32融合基因;SDS-PAGE分析显示将重组质粒pGEX-Sj26GST-Sj32在E.coli BL21中经IPTG诱导表达后，得到分子量约85kDa的条带，其中以5～7h处表达水平较高;Western-blot发现重组质粒pGEX-Sj26GST-Sj32表达产物可被Sj感染的兔血清识别。<br>　　口服免疫(per os，PO)组小鼠血清IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3、IgE和IgA水平分别在免疫后6、8、8、4、6、12和6周达峰值;血清IL-10和IL-12水平分别在免疫后12、6周达峰值。鼻腔粘膜(intranasal，IN)组小鼠血清IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3、IgE和IgA水平分别在免疫后4、2、6、2、4、8和8周达峰值;血清IL-10和IL-12水平分别于免疫后6周达峰值。PO组增殖水平于免疫后4w达高峰，而IN组于免疫后12w达高峰。PO组脾CD4+T细胞亚群于免疫后4w达最高水平，IN组CD4+T细胞亚群于免疫后12w达最高水平;PO组脾CD8+T细胞亚群于10w达峰值，IN组CD8+T细胞亚群于免疫后6w达最高水平。PO组和IN组小鼠脾细胞IL-10水平均于免疫后6w达最高;PO组小鼠脾细胞IL-12水平于免疫后6w达最高，IN组脾细胞IL-12水平于12w达最高水平。PO组小鼠脾细胞凋亡率于免疫后6w达最高，而IN组脾细胞凋亡率于12w达最高水平。<br>　　结论：<br>　　成功构建日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj26GST-Sj32)疫苗;该疫苗在免疫早期可诱导小鼠产生有效地Th1和Th2型混合性免疫应答。