RNA干扰沉默PDGFr-β基因对大鼠C6胶质瘤细胞增殖及放射敏感性的影响-论文-万方医学网

RNA干扰沉默PDGFr-β基因对大鼠C6胶质瘤细胞增殖及放射敏感性的影响

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摘要目的:探索RNA干扰抑制PDGFR-β的表达对大鼠C6胶质瘤细胞增殖的影响，及是否有放疗增敏作用。<br>　　方法:构建PDGFR-β-shRNA慢病毒干扰载体，转染至大鼠C6胶质瘤细胞中，将细胞分为NC(Negative Control，NC)组、KD(KnockDown，KD)组。用western-blot检测干扰后C6细胞中PDGFR-β的蛋白表达抑制水平。用MTT法比较两组细胞的生长曲线。用克隆形成实验检测两组联合放疗后细胞的存活率及放射敏感性。流式细胞仪检测两组联合放疗后细胞的周期分布。<br>　　结果:慢病毒载体转染C6细胞后，荧光显微镜下观察荧光率大于80％，表明转染成功。Western-blot检测KD组细胞中PDGFR-β的蛋白表达水平明显下降，且与NC组比较有显著性差异（P值＜0.05），蛋白表达抑制率为83.4％。MTT检测KD组较NC组细胞生长缓慢，但与NC组比较无统计学意义。克隆形成实验测得KD组联合放疗后比NC组联合放疗后细胞的平均致死剂量D0由1.843Gy降为1.297Gy，放射增敏比SER为1.421，提示有放疗增敏作用。流式细胞仪测得KD组联合放疗后细胞周期阻滞在G2/M期。<br>　　结论:沉默PDGFR-β的表达后，不能够抑制大鼠C6胶质瘤细胞的生长缓，但在体外具有放疗增敏作用，有关其放疗敏感性机制及体内实验有待进一步研究，PDGFR-β可作为胶质母细胞瘤治疗的靶点之一。