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黄连素抑制HepG2细胞增殖及下调VEGF的实验研究

摘要[目的]<br>  黄连素是一种存在于许多植物的根,茎,茎皮中,诸如伏牛花、北美黄莲、黄连、黄芩等中的重要的生物碱,具有一定的抗癌功效。本实验旨在了解黄连素对肝癌HepG2细胞的增殖抑制活性;观察它对肝癌细胞分泌VEGF的影响,并进一步探讨其相关机制。<br>  [方法]<br>  将黄连素以包括对照在内的四个浓度分别作用于培养的HepG2细胞,并于12h、24h、48h,用四甲基偶氮哇兰(MTT)比色法测定其生长抑制率。选择48h样本,用RT-PCR测定VEGF,NF-κB的mRNA,用Western Blot测定VEGF,NF-κB的蛋白表达。<br>  [结果]<br>  1.黄连素对肝癌细胞生长增殖的影响<br>  黄连素在50μmol/L~200μmol/L浓度时,随着作用时间延长,细胞抑制率逐渐增加(P<0.05);在作用时间相同时,随着药物浓度从50μmol/L递增至200μmol/L,抑制率也逐渐增加(P<0.05)。黄连素在一定浓度范围内对细胞增殖的抑制作用呈显著地时间浓度依赖模式。<br>  2.黄连素对肝癌细胞VEGF,NF-κB表达的影响<br>  Western Blot,RT-PCR测定人肝癌HepG2细胞经过药物处理48h后,随着黄连素浓度的递增,VEGF和NF-κB的mRNA,蛋白表达均逐渐下降。空白对照组和药物处理组之间差异均有统计学意义(P<0.05),不同处理组之间的差异亦有统计学意义(P<0.05)。<br>  3.NF-κB和VEGF变化存在相关性<br>  利用统计学软件pearson法相关性分析发现,VEGF,NF-κB的表达呈显著的正相关(P<0.05)。其mRNA,蛋白表达的pearson相关系数系数分别为0.901,0.917,显著性均小于0.05。<br>  4.NF-κB和细胞抑制率存在相关性<br>  利用统计学软件Spearman等级相关法分析发现,NF-κB与细胞抑制率的变化呈显著的负相关(P<0.05)。其mRNA,蛋白表达分别与细胞抑制率做相关分析,相关系数分别为-0.898、-0.972,呈高度负相关。<br>  [结论]<br>  1.黄连素对肝癌HepG2细胞在一定浓度范围内有显著的生长抑制作用,且呈浓度时间依赖性。<br>  2.黄连素能够下调HepG2细胞NF-κB,VEGF mRNA和蛋白的表达,且于48h后下调幅度最明显。<br>  3.黄连素抑制肝癌血管形成的可能机制之一是通过抑制NF-κB的激活从而下调VEGF的表达。<br>  4.黄连素抑制HepG2细胞增殖活性,可能通过抑制NF-κB的激活实现的。

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