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摘要目的:<br>　　利用多重PCR及反向斑点杂交技术，建立一种快速检测性传播疾病多种病原体的DNA芯片方法;应用该方法检测临床样本，评估其应用价值;分析广州市性病门诊患者各种病原体的流行情况。<br>　　方法:<br>　　1.从GenBank获取各菌株核苷酸序列并用生物信息学分析软件DNAStar7.1分析其保守性和变异性，选择目的基因，设计引物和探针。<br>　　2.多重PCR扩增体系扩增目的基因。<br>　　3.运用导流杂交技术制备DNA芯片。<br>　　4.DNA芯片技术检测的敏感性和特异性分析。<br>　　5.收集性病标本103份，用DNA芯片检测常见病原体。<br>　　结果:<br>　　1.通过GenBank获取淋病奈瑟菌(Ng)、沙眼衣原体(Ct)、生殖支原体(Mg)、梅毒螺旋体(Tp)16S rRNA基因，单纯疱疹病毒(HSV)1型、2型糖蛋白gD基因，人乳头瘤病毒(HPV)6、11、16、18型L1衣壳蛋白基因，运用DNAStar7.1和PrimerPremier6.0比较分析其保守区和高变区，设计出分别针对16S rRNA基因、gD糖蛋白基因、L1蛋白基因的3对通用引物和各病原体特异性探针，引物Tm在(55±1)℃，探针Tm在(60±1)℃。Ng、 Ct、Mg、Tp、HSV-1、HSV-2、HPV6、HPV11、HPV16、HPV18型扩增片段长度分别为456 bp、456 bp、457 bp、457 bp、279 bp、279 bp、127 bp、127 bp、131 bp和133 bp。<br>　　2.采用多重PCR同时扩增16S rRNA基因、gD基因和L1基因，1％琼脂糖凝胶电泳能得到相应的目的条带。优化结果显示Mg2+浓度1.5mM，引物浓度0.6μM，退火温度52℃时为最适条件。<br>　　3.建立的导流杂交技术能同时检测多种病原体，优化结果显示杂交温度在42℃，探针浓度为20μM时能获得理想结果。<br>　　4.敏感性分析结果显示Ng、Ct、Mg、Tp、HSV-1、HSV-2、HPV6、HPV11、 HPV16、HPV18检测敏感性分别为1 cfu、3 cfu、6.7 pg/μL、221 pg/μL、1 cfu、1 cfu、250 pg/μL、223 pg/μL、175 pg/μL、182 pg/μL。特异性分析显示各探针仅与相应病原体杂交，不与其他检测病原体或泌尿生殖道其他常见病原体交叉反应。<br>　　5.DNA芯片杂交检测103份临床样本，与临床常规检测结果比较，符合率为97.1％(100/103)。共检出Ng2例，Ct14例，Mg5例，HSV-218例，HPV68例，HPV1110例，HPV163例。未检出Tp、HSV-1和HPV18。<br>　　6.尿道或宫颈中Ct感染率高达21％，远高于Ng和Mg感染率，两者分别为3.2％和4.8％。生殖器溃疡中检出病原体均为HSV-2。前列腺样本中检出1例Ct和2例Mg。在生殖器疣样本中HPV6和HPV11检出率显著高于HPV16和HPV18。<br>　　结论:<br>　　1.DNA芯片技术能快速、准确地同时检测Ng、Ct、Mg、Tp、HSV-1、HSV-2、HPV6、HPV11、HPV16和HPV18，对于尿道炎、生殖器溃疡等患者的临床诊断有重要价值。适用于门诊患者和性病高危人群的病原体筛查。<br>　　2.广州地区引起尿道炎的病原体以Ct为主，而引起生殖器溃疡的主要病原体为HSV-2。HPV6和HPV11是引起生殖器疣的主要流行株。