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波叶青牛胆化学组分分析及其对实验性2型糖尿病肾病小鼠药效研究

摘要波叶青牛胆(Tinospora crispa L.)来源于防己科(Menispermaceae)青牛胆属植物波叶青牛胆的藤茎,其特点是毒性小、无致畸和诱变作用,具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎、免疫调节、降血糖等作用。<br>  糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy,DN)是糖尿病最常见、最严重的并发症之一,且发病机理复杂尚不清楚,目前对其治疗尚无安全有效的方法,因此研究开发一种安全性高、疗效稳定、副作用小的药物对补充药物治疗的不足具有重要意义。本文对波叶青牛胆化学成分进行了定性定量分析;乙醇提取物的急性毒性研究;乙醇提取物对STZ联合高脂饲料诱导的2型糖尿病肾病小鼠的疗效研究,并且通过体内筛选有效部位;最后对其治疗糖尿病肾病的有效活性部位进行了指纹图谱研究,并且经过LC-MS分析鉴定其主要有效化学成分。<br>  (1)对波叶青牛胆化学成分进行了定性定量分析。目前对波叶青牛胆研究报道较少,国内几乎没有文献报道,本文通过化学试剂颜色反应对波叶青牛胆中大类化学成分进行了初步测定,并且根据显色反应结果对其含有的化学成分进行了定量分析,结果表明其主要成分为生物碱类、多酚类、二萜内脂类、三萜皂苷类以及黄酮类。其中萜类成分含量最多。<br>  (2)研究波叶青牛胆对小鼠的急性毒性。本实验采用ICR小鼠为实验对象,采用改良寇氏法测定波叶青牛胆乙醇提取物的LD50,结果表明波叶青牛胆乙醇提取物LD50为4819mg/kg,属于低毒类中药。从给药组小鼠的病理切片观察可知,其主要毒副作用为肝毒性,表现为肝脏严重出血及空泡变性。对小鼠的肾脏无损伤作用。<br>  (3)乙醇提取物对STZ联合高脂饲料诱导的2型糖尿病肾病小鼠的疗效研究。采用高脂饮食联合单次小剂量注射STZ(80mg/kg)复制2型糖尿肾病(DN)小鼠模型。将80只造模成功的ICR小鼠分为模型组,TCEE低、中、高剂量组(155mg/kg,310mg/kg,620 mg/kg),CHCl3部位组(48mg/Kg)、EtOAc部位组(50mg/Kg)、BuOH部位组(126mg/Kg)、水溶性部位组剂量组(295mg/kg),以及卡托普利(3.13mg/kg)、消渴丸阳性药组(937.5mg/kg),并且设立正常对照组,共给药6周。18周末测定各组小鼠血清中总胆固醇、尿素氮、肌酐、胱抑素C水平,PAS染色观察肾脏病理变化。结果表明:TCEE高剂量组和BuOH部位组能显著降低DN小鼠各血清生化指标水平以及缓解肾小球肥大,肾小球基底膜增厚,系膜增生等病理变化。<br>  (4)对波叶青牛胆正丁醇部位RP-HPLC分析方法,流动相条件为:乙腈(:)0.02%三氟乙酸水溶液梯度洗脱(0-5min,2%∶98%~6%∶94%;5-20min,6%∶94%~15%∶85%;20-25min,15%∶85%;25-30min,16%∶84%;30-35min,17%∶83%;35-40min,17%∶83%~20%∶80%;40-53min,20%∶80%~38%∶62%;53-60min,38%∶62%)。通过LC-MS分析其主要化学成分,推测可能含有的2个化合物,分别为:Rumphioside Ac-D和Borapetoside B。

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