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摘要研究背景:<br>　　结肠癌是结肠粘膜上皮在环境、遗传等多种致癌因素作用下发生的恶性病变。近年来，我国结肠癌的发病率有逐渐增高的趋势。结肠癌通常起病隐匿，早期往往无明显的临床表现，病情发展缓慢，当出现明显的症状时大多已到了中晚期。深入研究癌症发生和发展的分子机制，进而开发癌症的新型治疗药物，是现今基础生物医学研究的重要前沿。17-DMAG为HSP90抑制剂，有望成为进展期结肠癌的新型治疗药物。<br>　　研究目的:<br>　　研究HSP90抑制剂17-DMAG（17-二甲胺乙胺基-17-去甲氧基格尔德霉素）对人结肠癌HT-29细胞的凋亡的影响，进一步使用蛋白质组学方法研究其调控的蛋白质的变化。<br>　　研究方法:<br>　　一、AnnexinV——FITC/PI双染法流式细胞仪检测经17-DMAG作用后HT-29细胞的凋亡率的变化。<br>　　二、免疫印迹实验验证Na+-K-ATPase和Prohibitin在17-DMAG作用HT-29细胞24小时后质膜蛋白质纯度变化。<br>　　三、使用0.5μM/L17-DMAG作用24小时组与对照组的质膜蛋白质，运用双向凝胶电泳技术分离蛋白质，快速银染法染色胶、扫描，进一步用ImageMaster2DPlatinum6.0图像分析软件分析每组中的差异蛋白质点。<br>　　四、使用0.5μM/L17-DMAG作用24小时组与对照组的分泌蛋白质，运用双向凝胶电泳技术分离蛋白质，快速银染法染色胶、扫描，进一步用ImageMaster2DPlatinum6.0图像分析软件分析每组中的差异蛋白质点。<br>　　研究结果:<br>　　1.AnnexinV-FITC双染法流式细胞仪检测结果显示，正常对照组HT-29细胞24小时自然早期凋亡率为（0.87±0.02）％，0.25μmol/L、0.5μmol/L、1.0μmol/L和2.5μmol/L17-DMAG作用24小时后细胞早期凋亡率分别为（2.32±1.78）％、(4.93±0.46)％、（6.86±1.36）％与(7.59±1.28)％;正常对照组HT-29细胞24小时的总自然凋亡率（早期+晚期）为（6.3±0.75）％，0.25μmol/L、0.5μmol/L、1.0μmol/L和2.5μmol/L17-DMAG作用24小时后细胞总凋亡率分别为(8.51±1.91)％、(20.88±13.97)％、（25.11±1）％和(32.11±3.13)％，17-DMAG作用HT-29细胞24h的凋亡率与对照组细胞凋亡率相比差异有统计学意义。(P=0.000)，此外，0.5μmol/L17-DMAG作用HT-29细胞12h、24h和36h的早期凋亡率和总凋亡率与相应的对照组比较均有升高，差异有统计学意义(P＜0.05)。<br>　　2.0.5μmol/L17-DMAG药物作用HT-29细胞24h后，Na+-K+-ATPase纯度增加而Prohibitin纯度下降。0.5μM17-DMAG药物作用HT-29细胞24小时组与对照组比较发现29个蛋白质差异点。<br>　　3.0.5μM17-DMAG药物作用HT-29细胞24小时组与对照组比较发现8个蛋白质差异点。<br>　　研究结论:<br>　　热休克蛋白90(HSP90)抑制剂17-DMAG呈现时间-剂量依赖性抑制人结肠癌HT-29细胞增殖，随着药物浓度的加大，作用时间的延长，诱导HT-29结肠癌细胞凋亡的能力增加。应用蛋白质组学分析发现0.5μM17-DMAG药物作用24小时组与对照组比较发现29个质膜蛋白质差异点和8个分泌蛋白质差异点。