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摘要目的:比较人食管鳞状细胞癌细胞TE13及经放射线照射筛选出的放射抗性细胞株TE13R120细胞中E-cadherin、vimentin的表达水平，研究上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）与食管癌放射抗拒性的关系。<br>　　方法:分别常规培养人食管鳞状细胞癌细胞TE13和经放射线照射筛选出的放射抗性细胞株TE13R120细胞，应用倒置相差显微镜观察两种细胞形态学变化。采用细胞划痕实验比较两种细胞的侵袭、迁移能力。应用实时定量荧光PCR方法(Real Time PCR)检测两种细胞中上皮表型标志物E钙黏蛋白(E-cadherin，E-cad)、间质表型标志物波形蛋白(Vimentin，VIM)的表达水平，并进一步应用免疫细胞化学(immunocytochemistry,ICC)方法半定量验证两种细胞中E钙黏蛋白、波形蛋白的表达量。<br>　　结果:<br>　　1细胞形态学差异:取对数生长期的单层细胞，在倒置相差显微镜下观察TE13细胞、TE13R120细胞的形态学差异。TE13细胞多呈片状生长，细胞之间连接紧密，界限不够清楚;TE13R120细胞轮廓较清晰，细胞连接不紧密，呈梭形或纺锤体形，细胞细长，大小不一，排列紊乱无规律，形态不规则。<br>　　2 TE13细胞及TE13R120细胞放射敏感性的差异:（此部分实验参照我课题组杨延灵的实验结果）细胞克隆实验测得两种细胞生物学参数，TE13R120细胞的D0、Dq和N值与亲代细胞TE13相比均增大，α/β比值降低，提示TE13R120较其亲本细胞更具放射抗性;2 Gy时存活分数SF2是代表细胞放射敏感性的重要指标，SF2越大，放射抗拒性越强，TE13R120细胞的SF2值高于亲代细胞TE13，进一步说明TE13R120细胞的放射抗性增强。<br>　　3放射抗性细胞TE13R120细胞周期延长:连续8天计数24孔板中的细胞数，绘制出TE13细胞和TE13R120细胞的半对数生长曲线，从细胞生长曲线图可以看出，TE13R120细胞的生长速率较TE13细胞慢，TE13R120细胞的群体倍增时间为(20.70±0.57)h，长于亲代细胞TE13细胞的(17.67±0.99)h，(P=0.024)。<br>　　4 TE13细胞、TE13R120细胞侵袭、迁移能力的比较:于灭菌六孔板中以完全培养基培养两种细胞至快铺满单层时进行细胞划痕，换为无血清培养基，分别于划痕后6h、12h、24h在倒置显微镜下观察划痕中细胞侵袭迁移情况并拍照。发现12h、24h时划痕中TE13R120细胞较TE13细胞数多，24h时TE13细胞迁移距离为(97.18±3.04) um，TE13R120细胞迁移距离为203.52(40.42) um，（P=0.000），差异有统计学意义，TE13R120细胞较TE13细胞侵袭与迁移能力增强。<br>　　5 TE13细胞经射线照射后发生上皮细胞间质转化（EMT）:TE13细胞经射线照射至120 Gy，细胞形态由均匀的多边形向大小不等的细长、纺锤体形变化;实时定量PCR法检测两种细胞中上皮间质标志物E-cad、Vimentin的表达情况，以GAPDH为内参，TE13R120细胞较TE13细胞上皮表型标志物E-cad表达降低，（P=0.000），差异有统计学意义;TE13R120细胞较TE13细胞间质表型标志物波形蛋白Vimentin表达升高，(P=0.030)，差异有统计学意义。<br>　　6免疫细胞化学检测TE13细胞、TE13R120细胞中E-cad蛋白和Vimentin蛋白表达情况:两种蛋白在TE13细胞和TE13R120细胞的表达主要定位于胞浆和胞核中，TE13细胞中E-cad蛋白的阳性表达高于TE13R120细胞，Vimentin蛋白的阳性表达则低于TE13R120细胞。<br>　　结论:<br>　　1通过电离辐射反复照射食管鳞状细胞癌TE13细胞可筛选出放射抗性细胞系TE13R120细胞，TE13R120细胞较TE13细胞倍增时间延长，具有稳定的放射抗性表型。<br>　　2放射抗性食管癌细胞TE13 R120细胞侵袭、迁移能力增强。<br>　　3反复放射线照射诱导TE13细胞发生形态学变化和分子水平变化，符合上皮间质转化。