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摘要目的:当前，随着国家对宫颈癌等防癌知识的普及，及有计划细胞学筛查的大力开展，宫颈癌前病变得以早期发现及阻断，并且宫颈癌也得到了及时、有效的治疗，宫颈癌发病率的下降幅度很大，但仍是女性生殖器官癌症之首，且呈现明显年轻化的趋势，因此迫切需要解决这个问题更有效的治疗方案。大量研究表明，人乳头瘤病毒感染是宫颈病变发生的必要条件，这种感染往往是HPV持续阳性，感染病毒多是高危亚型。在目前已知的众多HPV亚型中，临床上最常见的是HPV16亚型和18亚型，属高危型。所以深入探讨HPV感染子宫颈上皮细胞后的致癌机理、进而寻找针对致病环节的有效防治手段，仍然是广大学者面临的重要课题。<br>　　大量的科学研究显示，不仅在胚胎形成及发育过程、慢性炎症、机体组织纤维化过程中上皮细胞间质转化(EMT)发挥着极其重要的作用，近年来，研究人员发现，上皮间质转化有可能与肿瘤发生和肿瘤进展相关,目前是肿瘤研究的焦点之一。随着基因治疗技术的迅猛发展，RNA干扰(RNAi)引起了人们的极大重视，它是一种基因阻断技术，是在mRNA(messenger RNA，信使RNA)水平上关闭相应的序列基因并抑制其表达，即转录后基因沉默，目前一些研究中已经取得了突破性的进展，广泛应用于病毒相关疾病、恶性肿瘤、遗传疾病及神经性疾病等研究中，但其用于体内实验性治疗研究的报道尚少。本实验旨在证实HPV16 E6/E7RNA干扰对人宫颈鳞癌移植瘤的抑制作用，及转化生长因子信号通路的变化，以期通过动物体内实验，探讨高危型HPV16 E6、E7与宫颈病变中的上皮间质转化的关系，及其在宫颈癌发病中调控机制。<br>　　方法:<br>　　首先建立人宫颈癌裸鼠移植瘤模型。体外培养人宫颈癌SiHa细胞（HPV16+），接种于裸鼠皮下，具体位置为其背侧右前肢近腋下，生长约30天后，当移植瘤体积为60～100mm2，32只裸鼠随机分为4组，实验组和对照组各2组，实验组包括E6和E7组。将本课题组前期试验证实有效的HPV16 E6和E7 miRNA即16E6-MiR(12MR0018A)、16E7-MiR-2(12MR0018C-2)分别转染注入瘤体内，每2天注射1次，至少28天;对照组包括空质粒对照组和生理盐水对照组，每次分别注射相同剂量的空质粒和生理盐水。本实验使用的是动物体内转染试剂EntransterTM-in vivo。每次注射前测量肿瘤的体积及裸鼠的重量，动态观察裸鼠的生长状况，最后一次给药48小时后以脱颈法处死裸鼠，立即取出肿瘤，测量肿瘤的体积及质量;应用的检测方法是实时荧光定量PCR。测定各组HPV16 E6/E7的表达情况，以及E-钙粘蛋白(E-cadherin)、N-钙粘素(N-cadherin)和TGF-β1、smad4的mRNA表达情况;并对数据进行统计学分析。<br>　　结果:<br>　　1本实验成功建立肿瘤裸鼠模型;32只裸鼠全部存活，成瘤潜伏期为25-35天，32只裸鼠均荷瘤成功，成瘤率为100％。<br>　　2各组HPV16 E6、E7的变化:应用EntransterTM-in vivo(ul)分别转染HPV16 E6和E7 miRNA后，E6组的HPV16 E6基因和E7组的HPV16E7基因水平较生理盐水组和空质粒组均明显降低(P=0)，生理盐水和空质粒两组间无明显差异(P=0.761＞0.05、P=0.486＞0.05)。<br>　　3 HPV16 E6，E7基因表达沉默后，E6和E7组的E-cadherin在基因水平较生理盐水和空质粒组明显升高(P=0)，而N-cadherin基因表达较生理盐水组和空质粒组均明显降低(P=0)，生理盐水组和空质粒组两组间无明显差异(P=0.656＞0.05、P=0.264＞0.05)。<br>　　4 PV16 E6，E7基因表达沉默后，E6和E7组的TGF-β1和smad4基因表达水平较生理盐水和空质粒组表达明显降低(P=0)，差异均有统计学意义（P=0），生理盐水组和空质粒组两组间无明显差异(P=0.799＞0.05、P=0.641＞0.05)。<br>　　结论:<br>　　1人宫颈鳞癌组织裸鼠模型成瘤率高，死亡率低，实验周期短，具有可重复性，易于客观地评价疗效，可作为体内研究恶性肿瘤生物学特性的重要科研工具，同时也是探索宫颈癌病因和临床治疗方法的理想实验模型。<br>　　2采用RNA干扰技术，利用宫颈癌裸鼠移植瘤模型中瘤内注射技术，显示经miRNA处理后，E6、E7基因表达水平明显下降，且具有特异性，抑制移植瘤生长，可作为宫颈癌防治的一种技术手段。<br>　　3 HPV16 E6、E7基因的表达沉默后， N-钙粘蛋白基因表达显著降低，而E-钙粘蛋白的表达水平显著提高，发生了EMT的逆转过程，即间质上皮的转化。<br>　　4 HPV16的E6、E7基因表达下降后，TGF-β1和smad4基因水平下降，说明针对HPV16的miRNA这一基因阻断技术，可能通过TGF-β/smad信号途径抑制EMT过程，从而抑制肿瘤细胞增殖、侵润和转移。