检索历史 清除

摘要实验目的：<br>　　目前，肝移植已经成为治疗肝硬化，肝衰竭等终末期肝病的重要治疗方法。在临床肝移植中，缺血再灌注损伤(Ischemia-reperfusion injury，IRI)是导致移植肝无功能的主要原因。研究表明边缘供体，尤其心脏死亡供体(donation after cardiac death，DCD)对于IRI更加敏感。目前研究表明丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)家族P38蛋白参与这一过程。本实验拟以正常移植组为对照组，研究不同热缺血时间P38蛋白的表达情况情况，以及与肝功能、病理之间的关系，探讨其作用的机制。<br>　　实验方法：<br>　　1、建立DCD供体大鼠原位肝移植模型。<br>　　2、将30只SPF级SD雄性大鼠随即分为假手术组（5只）、DCD供肝组(25只)。假手术组仅行开腹手术，处死后留取标本，DCD供肝组采用剪破膈肌诱导气胸并钳夹心底部诱导心脏停跳法建立DCD模型，假手术组、正常移植组和DCD移植组均于术后1h，2h，4h，6h，12h取下腔静脉血检测血ALT水平，于大鼠心脏停跳后0min，5min，10min，15min，20min处死后留取标本，应用western-blot方法检测活化p38蛋白，应用RT-PCR方法检测P38RNA表达情况。检测炎症因子TNF-a、IL-1、IL-18表达情况，HE染色方法评估肝脏损伤程度，并进行统计学分析。<br>　　实验结果：<br>　　1、肝脏组织P38mRNA的表达<br>　　各分组术后1h、2h、4h、6h及12h取肝脏标本，检测P38P38表达，无显著性差异(P＞0.05)。<br>　　2、蛋白水平上p-P38（磷酸化的P38）在组织中的表达<br>　　各分组术后1h、2h、4h、6h及12h取肝脏标本，检查p-P38。在各时间段，p-P38在蛋白表达上有显著性差异(P＜0.01)，DCD移植组高于正常移植组高于假手术组<br>　　3、肝脏组织TNF-α、IL-1、IL-18mRNA的表达<br>　　在各时间段，TNF-a、IL-1、IL-18在RNA表达上有显著性差异。DCD移植组高于正常移植组高于假手术组。(P＜0.01)。<br>　　4、血生化检查<br>　　各分组术后1h、2h、4h、6h及12h取血清，检测ALT水平。血清ALT水平，假手术组，正常移植组和DCD组大鼠血清ALT水平在移植后1h、2h、4h、6h及12h均有显著性差异(P＜0.01)。DCD移植组高于正常移植组高于假手术组。<br>　　5、各时间点肝脏的病理变化情况<br>　　肝移植再灌注后肝脏小叶结构开始破坏，出现出血、炎性细胞浸润、水肿、脂肪变性、细胞皱缩核分裂甚至坏死、凋亡。且随着时间从1h增加到12h，肝脏损伤显著增加。DCD组肝移植后肝脏损伤在各时间点较正常肝移植后明显提前且程度更严重。<br>　　实验结论：<br>　　1、各组肝脏标本中均检测到p-P38的表达，且各组表达有显著性差异，随肝脏病理变化和炎症因子变化而变化，表明P38蛋白参与了移植肝缺血再灌注损伤的病理过程。<br>　　2、DCD移植组变化趋势与正常移植组相同，但升高程度较高。