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摘要实验目的：<br>　　肝脏移植是治疗终末期肝病的唯一有效手段，特别是DCD肝移植被认为是最有前景的器官捐献供体来源，但它同时存在热缺血、冷缺血时间较长，缺血再灌注损伤是移植肝功能受损乃至丧失的主要因素之一。研究证明，肝脏缺血再灌注损伤(IRI)是细胞内受体和细胞外受体介导的氧化应激反应，其中NOD样受体作为细胞内受体被广泛关注，NLRP3作为NOD样受体家族的一名重要成员，作为研究热点在慢性炎症性疾病中被大量研究，随着对NLRP3研究的深入，其在缺血再灌注损伤中的作用逐渐被重视，当前研究表明NLRP3在肝脏、肾脏、颅脑、肾脏缺血再灌注损伤方面都发挥着重要作用。<br>　　NLRP3主要以组成炎症体发挥作用，NLRP3炎症体主要包括3个重要的分子，它们分别是NLRP3、ASC、pro-caspase-1。炎性体能够激活caspase-1，活化的caspase-1能够酶切IL-1β和IL-18前体分子而生成具有生物学活性的IL-1β和IL-18，参与炎症反应等生物学效应。<br>　　近年来有关NLRP3炎性体在疾病中作用的研究取得很大进展，研究表明NLRP3炎性体与慢性关节炎、系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病的发生密切相关。NLRP3炎性体在器官移植中的作用也逐渐受到重视，研究发现炎性体相关基因的表型可以作为干细胞移植后临床结果的重要诊断指标，同时有研究证实NLRP3炎性体与肝脏的缺血再灌注损伤有关。本研究主要探究NLRP3信号通路及其相关分子在肝移植缺血再灌注损伤发生发展中的作用及其分子机制，并为DCD肝移植缺血再灌注损伤的防治提供实验基础和理论依据。<br>　　实验方法：<br>　　本实验采用双套管法建立大鼠肝移植模型，100只雄性SD大鼠随机分成3组:1、假手术组(n=20);2、正常肝移植组（n=40，热缺血时间控制在1-2，min）;3、DCD肝移植组（n-40，热缺血时间控制在20min），在移植再灌注后1h、2h、4h、6h、12h分别取静脉血及肝组织标本，用组织病理切片H&E染色观察肝移植再灌注后移植肝的损伤情况，检测血清中ALT水平来评估移植肝肝功能，采用荧光定量RT-PCR检测移植物中NLRP3、IL-1β、IL-18 mRNA水平的表达，Western检测NLRP3的表达，研究肝移植缺血再灌注中NLRP3及相关分子的表达及其相互关系。<br>　　实验结果：<br>　　1、大鼠肝移植术后生存率<br>　　DCD肝移植术后12小时生存率50％，正常肝移植术后12小时生存率90％。<br>　　2、NLRP3mRNA在肝脏组织中的表达<br>　　NLRP3mRNA水平均显著高于假手术组(P＜0.05)，其中DCD移植组高于正常移植组(P＜0.05)，其差异具有统计学意义。<br>　　3、NLRP3蛋白在肝脏组织中的表达<br>　　NLRP3蛋白水平均显著高于假手术组(P＜0.05)，其中DCD移植组高于正常移植组(P＜0.05)，其差异具有统计学意义。<br>　　4、细胞因子IL-1β、IL-18、caspase-1mRNA在肝脏组织中的表达IL-1β、IL-18、caspase-1mRNA水平均显著高于假手术组(P＜0.05)，其中DCD移植组高于正常移植组(P＜0.05)，其差异具有统计学意义。<br>　　5、肝功能检测<br>　　肝移植再灌注后血清ALT水平，与假手术组相比，DCD组和正常肝移植组大鼠血清ALT水平在移植后1h、2h、4h、6h及12h均明显升高(P＜0.05);与正常肝移植组相比，DCD组各时间点血清中ALT水平显著升高(P＜0.05)。<br>　　6、各时间点肝脏的病理变化情况<br>　　移植后肝组织病理观察:肝移植再灌注后肝脏小叶结构开始破坏，出现出血、炎性细胞浸润、水肿、脂肪变性、细胞皱缩核分裂甚至坏死、凋亡。且随着时间从1h增加到12h，肝脏损伤显著增加。DCD组肝移植后肝脏损伤在各时间点较正常肝移植肝移植后明显提前且程度更严重。<br>　　实验结论：<br>　　NLRP3在大鼠DCD肝移植再灌注后显著表达，较正常肝移植组明显，它可能通过激活caspase-1等参与肝移植缺血再灌注后损伤，导致移植肝功能受损。