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冷缺血期氢气膨肺对大鼠肺脏缺血再灌注损伤的影响

摘要目的:肺移植是很多肺部疾病终术期的最终治疗方法,而缺血再灌注过程中产生的活性氧族自由基造成的肺损伤是导致肺移植预后不佳的主要原因。近年来发现,氢气具有抗炎症反应、抗氧化和抗细胞凋亡的作用。在肺移植过程中供体或受体吸入氢气都有助于减轻供体的缺血再灌注损伤,改善移植物功能。本实验的研究目的是观察冷缺血期3%氢气膨肺对大鼠缺血再灌注肺损伤的影响。<br>  方法:雄性SD大鼠随机分为氢气组和对照组,腹腔注射3%戊巴比妥钠进行麻醉,继而行气管切开术,肺脏灌注,获取离体心肺组织。氢气组冷缺血期用3%氢气+40%氧气+57%氮气的混合气膨肺,对照组用40%氧气+60%氮气的混合气膨肺,将离体肺置于4℃C冰箱,每隔20 min置换一次肺内气体,持续2h。然后利用cuff管技术行供体肺移植。移植成功后再灌注2h,并分别在移植前、再灌注时、以及再灌注后每隔30 min进行一次动脉血气分析。再灌注2h后大鼠全身肝素化,自肺静脉采血行血气分析,自股动脉收集血液样本行高速离心,离心后取上清液留取血清标本,存放于-20℃冰箱。用酶联反应吸附法(ELISA)测定血清中白细胞介素-8(IL-8)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平。使用黄嘌呤氧化酶法按照说明书检测肺组织中超氧化物歧化酶(SOD)的活性。使用硫代巴比妥酸法测定肺组织中丙二醛(MDA)含量。使用比色法测定肺组织中髓过氧化物酶(MPO)的活性。每组最终纳入8对符合要求的大鼠。<br>  结果:冷缺血期氢气浓度可以稳定的维持在1.99%到3%之间。氢气组血清中IL-8水平、TNF-α含量和肺组织中MPO的活性(分别为340±84 pg/ml,405±115 pg/ml,0.7±0.3 U/g)均低于对照组(依次为443±94 pg/ml,657±96 pg/ml,1.1±0.5 U/g)(P<0.005)。氢气组肺组织中MDA含量(4.2±1.2 nmol/mg)低于对照组(7.7±2.3 nmol/mg),而SOD的活性(51±10 U/mg)高于对照组(33±9 U/mg)(P<0.05)。氢气组湿干重比值(5.2±0.8)低于对照组(6.5±0.7)(P<0.05)。氢气组的细胞凋亡指数(AI)为(34±9)明显低于对照组(52±11)(P<0.05)。氢气组肺组织学损伤评分(2(1-3))和免疫组化评分(4.0±1.8)也低于对照组为(3(2-4),6.2±2)(P>0.05)。氢气组肺静脉血的氧合指数(PvO2/FiO2)较对照组有所改善,但无统计学意义。氢气组半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)在肺组织中的表达水平低于对照组,但无统计学意义(P>0.05)。<br>  结论:冷缺血期3%氢气膨肺,可以改善肺移植缺血再灌注损伤和移植肺的功能。

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