摘要目的:检测miR-21对脑缺血/再灌注损伤后血脑屏障的保护作用。<br> 方法:制作大鼠脑缺血/再灌注模型,缺血90分钟,再灌注的同时分别给以miR-21质粒、siRNA质粒、空质粒转染,待模型老鼠成活三天后取脑。采用westernblot检测凋亡相关蛋白bax、bcl-2、caspase3的表达水平,采用免疫荧光检测自噬相关蛋白lc3、beclin1的分布及表达水平,采用电镜微观观察神经元细胞的整体状况、胞内细胞器的情况、血管内皮细胞的紧密连接以及星形胶质细胞足状突情况,以此评估血脑屏障的完整性。综合以上结果,评价miR-21对脑缺血/再灌注损伤后血脑屏障的保护作用。<br> 结果:相对于siRNA、空质粒转染组,miR-21转染组促凋亡蛋白bax表达水平下降,促凋亡蛋白bcl-2表达水平升高,凋亡执行者caspase3表达水平降低。自噬蛋白lc3、beclin1表达水平下降。电镜下miR-21转染组神经元细胞整体肿胀不明显,胞浆丰富,胞内细胞器数量和形态基本接近正常,血管内皮细胞紧密连接紧密,星形胶质细胞足状突数量较多。siRNA转染组:神经元大多肿胀,胞浆发空,细胞器减少,普遍状态差,线粒体肿胀、空虚、变性、减少,可见自噬小体、溶酶体,并可见吞噬物存在,核固缩、核碎裂多,小胶质细胞数量多且肿胀,血管内皮细胞紧密连接中断,胞内线粒体变性多,星形胶质细胞板层突不完整甚至局部消失,血脑屏障破坏严重。<br> 结论:miR-21对脑缺血/再灌注损伤后血脑屏障具有保护作用。本实验证实miR-21可以通过减少凋亡和自噬的发生,维持血脑屏障的完整性,减少神经元细胞水肿和坏死,从而减轻脑缺血再灌注损伤,而siRNA则可以加重这种损伤。MiR-21可以作为脑缺血疾病的潜在治疗靶点,具有重大意义。
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