摘要目的:将大鼠上颌第一磨牙进行间接盖髓后,采用苏木精—伊红(hematoxylin-eosinstaining,HE)染色法和免疫组织化学法观察牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein-1,DMP-1)、骨涎蛋白(bone sialoprotien,BSP)和骨桥蛋白(osteopontion,OPN)在修复性牙本质中的表达和分布,并将这三种蛋白在修复性牙本质(reparative dentin, RepD)中的表达与在原发性牙本质(primary dentin,PD)中的表达进行比较。从而进一步明确这三种蛋白在修复性牙本质形成中的作用,为临床上活髓保存和治疗提供实验基础和理论依据。<br> 方法:选5只6周Wistar雄性的大鼠,体重在80-100克。取每只大鼠两侧上颌第一磨牙,共计10颗磨牙。建立大鼠磨牙间接盖髓术的模型,采用10%的水合氯醛(350mg/kg)腹腔内注射麻醉后,仰卧固定并暴露出上颌第一磨牙,在近中面朝向近中髓角处钻磨,深达牙本质深层。用无菌生理盐水消毒并用无菌棉球擦干窝洞,Dycal氢氧化钙糊剂间接盖髓,玻璃离子水门汀充填。<br> 在间接盖髓术后2周,用10%的水合氯醛(350mg/kg)深度麻醉。4%多聚甲醛心内灌注固定1h,迅速分离上颌的磨牙,立即将标本置于新鲜配制的4%多聚甲醛溶液中4℃固定48h。固定后用流动水冲洗30min,8%EDTA脱钙4周,每3天换一次脱钙液,直至拍X-Ray确定标本脱钙完全。将脱钙的组织进行流水冲洗24h,修整标本呈2~3mm厚。梯度酒精脱水,二甲苯透明,浸蜡,常规包埋,沿牙体近远中长轴方向切片,片厚4μm,选取经过盖髓处形成修复性牙本质的切片进行HE染色、免疫组织化学法检测。比较DMP-1、BSP、OPN在原发性牙本质和修复性牙本质中的表达和分布。<br> 结果:在间接盖髓术治疗后2周,HE染色显示在间接盖髓的位置处牙本质的下方形成修复性牙本质,与原发性牙本质相比,牙本质小管形状不规则且数量较少。免疫组织化学染色显示,在修复性牙本质中,DMP-1的表达和分布相似,但在修复性牙本质中DMP-1的表达少于原发性牙本质。BSP和OPN在修复性牙本质的初期均有表达,但在原发性牙本质中没有表达。<br> 结论:在修复性牙本质中,DMP-1、BSP和OPN的表达很相似。与原发性牙本质相比较,修复性牙本质中DMP-1的表达减少可能与牙本质小管数量减少有关;在修复性牙本质中,BSP和OPN都在早期表达有表达,这表明BSP和OPN可能通过参与HA的形成及调节新分化的成牙本质细胞向新形成的牙本质基质的黏附来参与早期的修复性牙本质形成。
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