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川楝素对人肠癌SW480细胞的抑制作用及其作用机制的探讨

摘要研究目的:本实验旨在探讨川楝素对人肠癌SW480细胞的抑制作用及相关分子机制;<br>  研究方法:采用MTT比色法,观察不同浓度的川楝素分别作用人肠癌细胞株SW480不同时间后增殖的影响;AnnexinⅤ/PI双染色法——使用流式细胞仪,检测川楝素对人肠癌细胞株SW480凋亡的影响;Hoechst33342染色法——应用荧光显微镜检测川楝素对人肠癌细胞株SW480凋亡形态的变化;应用流式细胞仪检测川楝素对人肠癌细胞株SW480细胞周期的影响;激光共聚焦显微镜下观察川楝素作用人肠癌细胞株SW480后β-catenin的核转位情况;实时荧光定量PCR法检测川楝素对人肠癌细胞株SW480相关基因表达的影响;免疫印迹法(Western Blotting)检测川楝素对人肠癌细胞株SW480的相关蛋白含量的影响。<br>  研究结果:0.031μM-0.5μM浓度的川楝素能抑制人肠癌细胞株SW480的增殖,具有时间及浓度依赖性;0.125μM、0.5μM浓度的川楝素作用人肠癌细胞株SW48048 h后能明显引起早期凋亡,且形态学上观察到出现凋亡小体,并呈现浓度依赖性;与阴性对照组比较,0.125μM、0.25μM、0.5μM的川楝素作用人肠癌细胞株SW48024 h后,随着药物浓度的增大,G0/G1期前出现明显的亚二倍体区,S期比例由19.40%上升至23.0%,细胞被阻滞于S期。0.5μM浓度的川楝素作用人肠癌细胞株SW48048 h后,细胞核内的β-catenin向胞核外转移;0.125μM、0.5μM浓度的川楝素作用于人肠癌SW48048 h后,Bax、Bak、GSK-3β表达上升,Bcl-2、Bcl-xL、Survivin、cyclin D1、cyclin D2、cyclin D3、β-catenin、VEGFA、c-myc、COX-2表达下降;0.125μM、0.5μM浓度的川楝素作用于人肠癌细胞株SW48048 h后,其相关蛋白Bax、GSK-3β含量上升,Bcl-2、Pro-caspase3、Pro-PARP、P-AKT Ser473、AKT、P-GSK-3βSer9、β-catenin、VEGFA含量下降。<br>  研究结论:川楝素能体外抑制人肠癌细胞株SW480的增殖;川楝素能诱导人肠癌细胞株SW480凋亡;川楝素对人肠癌细胞株SW480的抑制作用可能是通过AKT/GSK-3β/β-catenin信号通路实现的。

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