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摘要目的：采用分子生物学技术构建重组Bb(pGEX-Sj26GST)疫苗，利用分子免疫学技术研究该疫苗免疫BALB/c鼠诱导的动态免疫应答，以期为血吸虫病的防治提供一种新型、安全、有效的疫苗。<br>　　方法：家兔感染Sj尾蚴42d后剖杀，经门静脉灌注法收集Sj成虫，以用RNeasy Mini试剂盒抽提到的成虫总RNA为模板，RT-PCR法扩增Sj26GST抗原编码基因;从本室保存的重组菌BL21中抽提载体质粒(pGEX-1λT);利用T4 DNA连接酶将抗原编码基因与载体连接，得到重组质粒pGEX-Sj26GST;将重组质粒电穿孔转化Bb得到重组Bb(pGEX-Sj26GST)疫苗，再将重组质粒转化至E.coli BL21(DE3)中，经TPTG诱导后，利用SDS-PAGE和Western blot研究其表达效率。<br>　　将88只BALB/c鼠随机分为两组，每组44只，分别经皮下注射（SC组）和鼻腔粘膜（IN组）接种重组疫苗免疫小鼠，在免疫后0～20周，每2周每组随机剖杀4只小鼠，取眼球血，用常规ELISA法检测血清抗体IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3、IgA和IgE，双抗体夹心ELISA法检测血清细胞因子;无菌取脾，制备悬浮脾细胞，用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测脾细胞增殖、流式细胞仪(FACsort)检测T细胞亚群和脾细胞凋亡、双抗体夹心ELISA法检测脾细胞上清液中细胞因子（IFN-γ、 IL-10和IL-17）的动态变化。<br>　　结果：RT-PCR扩增出676bp的Sj26GST抗原编码基因;双酶切证实Sj26GST抗原编码基因成功插入pGEX-1λT载体中，在重组Bb疫苗中，经PCR扩增得到长度为676bp的目的基因片段;SDS-PAGE分析提示重组质粒pGEX-Sj26GST经IPTG诱导后，可在E.coli BL21(DE3)中表达大小约52kDa的融合蛋白，薄层扫描分析示表达的融合蛋白约占总菌体蛋白的20％，且在诱导后3～5h表达量较高，Western blot表明该融合蛋白可被Sj感染的兔血清识别。<br>　　SC组小鼠血清IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3和IgA水平分别于免疫后8、6、10、8、10和10周达最大值(P＜0.01或P＜0.05); IN组IgG、IgG2a、IgG2b、IgG3和IgA分别于免疫后6、10、4、12和6周达峰值(P＜0.01或P＜0.05)，IgG1在整个过程中升高不明显，且于16～20周轻微下降;两组均未检测到IgE。SC组小鼠血清IFN-γ于4周升高明显并达峰值，IN组于10周达最大值(P＜0.01或P＜0.05); SC组IL-17于6～8周显著升高并达峰值;IN组于4周达最大值(P＜0.05)，两组均未检测到IL-10。SC组小鼠脾细胞增值水平于免疫后8W达最高水平;IN组于免疫后4W达最大值(P＜0.01或P＜0.05)。SC组和IN组CD4+T细胞均于8W达峰值(P＜0.01或P＜0.05);两组CD8+T细胞分别于8W和6W达较高值(P＞0.05)。SC组脾细胞凋亡水平于免疫后2W达最大值（P＜0.01或P＜0.05）;IN组于4周达峰值(P＜0.01)。与0W比，SC组和IN组脾细胞上清液中IFN-γ水平均于免疫后2W达峰值(P＜0.01);SC组和IN组IL-17水平分别于14W和12W达较高水平(P＜0.01或P＜0.05);两组均未检测到IL-10。<br>　　结论：成功构建了日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj26GST)疫苗;重组质粒pGEX-Sj26GST可在大肠埃希菌BL21中获得表达，且表达的融合蛋白具有特异的抗原性;该重组疫苗可诱导小鼠产生有效的免疫应答。