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摘要背景:<br>　　胃癌是目前世界上第四大最常见的恶性肿瘤并且是第二大引起癌症相关死亡的病因之一。尽管胃癌的诊断与治疗水平在不断提升，但是其预后仍较差。胃癌的发病机制极其复杂，涉及遗传易感性、环境不良反馈、免疫调节失衡等多方面的因素，其中抑癌基因的甲基化失活在胃癌的发病中占有重要地位。<br>　　近年来发现，Semaphorins家族具有抗肿瘤活性，semaphorin3B(SEMA3B)作为Semaphorins家族的成员之一，在非小细胞型肺癌、肝癌、胆管癌和人HEY卵巢癌细胞系中表现出抗癌作用，但是经甲基化作用而失活。SEMA3B基因的甲基化作用在胃癌中的意义还有待进一步的研究。<br>　　目的:<br>　　本实验旨在人胃癌细胞系（AGS，BGC-823，MGC-803和SGC-7901）和人胃癌组织临床样本的基础上，观察SEMA3B基因在胃癌中的表达状态，初步探讨其表达异常与甲基化的关系，并阐明可能的作用机制。<br>　　方法:<br>　　1.收集30例初治，未经药物治疗的胃癌患者术后标本，并相应取的癌旁正常组织。通过实时荧光定量PCR技术，评价SEMA3B基因在配对样本中的表达情况，并关联临床病理参数以分析可能出现的阳性结果。<br>　　2.在人胃癌细胞系（AGS，BGC-823，MGC-803和SGC-7901）的基础上，探讨经去甲基化剂5-氮-2'-脱氧胞苷处理后，SEMA3B基因和p53基因的表达情况。采用MethPrimer在线软件，预测SEMA3B全段基因的CpG岛分布，设计目标序列的甲基化引物。同时应用亚硫酸氢盐测序法(BSP)观察SEMA3B基因18号外显子的甲基化状态，讨论SEMA3B基因表达改变的可能机制。<br>　　3.应用生物信息学技术，通过Agilent Literature Search Software生成SEMA3B基因的作用网络，阐明SEMA3B基因与受体类似物VEGF及其受体Nrp之间的关系，为将来的研究提供方向。<br>　　结果:<br>　　1.SEMA3B基因的mRNA水平在胃癌组织中是降低的。而且SEMA3B基因的表达下调与胃癌的肿瘤大小和肿瘤N-分期相关。<br>　　2.5-氮-2'-脱氧胞苷能够基于不同的作用时间和浓度，逆转SEMA3B基因在胃癌细胞系（AGS，BGC-823，MGC-803和SGC-7901）中mRNA和蛋白的表达水平。p53基因在5-氮-2'-脱氧胞苷处理后的AGS，BGC-823，MGC-803胃癌细胞系中其mRNA的表达上升，且在后二者中的变化中有统计学差异，但是p53基因在SGC-7901中的表达是降低的。<br>　　3.SEMA3B基因18号外显子在AGS，BGC-823，MGC-803和SGC-7901胃癌细胞系中呈高度甲基化状态，经5-氮-2'-脱氧胞苷处理5天后，均有不同程度的去甲基化表现。进一步对胃癌组织的临床标本及其配对正常胃粘膜组织的研究发现，胃癌组织（15例）的SEMA3B基因18号外显子的甲基化率与正常胃粘膜组织相比是升高的(p＜0.05)。<br>　　4.利用Agilent Literature Search Software，引入“Sema3b，p53，neuropilins，vascular endothelial growth factor, cancer”等检索词，一共纳入20篇文献，构建的SEMA3B基因作用网络图清晰的指出了SEMA3B基因是通过mmp2蛋白与vegfa和p53起作用的。<br>　　结论:<br>　　SEMA3B基因在胃癌中表达降低，这与其基因甲基化失活有关。5-Aza-2'-deoxycytidine能够逆转SEMA3B基因的甲基化状态。