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摘要论文一大黄素对脂多糖诱导肠上皮细胞缺氧诱导因子-1a/环氧化酶-2通路的干预<br>　　一、目的<br>　　观察脂多糖(LPS)处理肠上皮细胞对缺氧诱导因子-1a(HIF-1a)及下游炎症相关靶基因环氧化酶-2(COX-2)表达的影响，探讨大黄素干预的可能作用靶点。<br>　　二、方法<br>　　建立LPS处理人肠上皮细胞的体外实验模型。<br>　　1.用Western blot检测LPS不同剂量和不同时间处理组的HIF-1a和COX-2蛋白表达的变化趋势;检测LPS和不同剂量大黄素共同干预组的HIF-1a、COX-2、NF-κB抑制因子(IκB-a)和核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达的变化趋势。<br>　　2.用PCR检测LPS处理组与LPS和大黄素共同干预组HIF-1a的mRNA水平。<br>　　3.用MTT法检测大黄素对肠上皮细胞增殖情况的影响。数据采用单因素方差分析，以P＜0.05为差异具有统计学意义。<br>　　三、结果<br>　　1.LPS作用可引起HIF-1a表达升高，且有时间和剂量效应关系。随LPS浓度的增加，HIF-1a的表达量先增高后降低，在浓度为10-3 mg/ml时HIF-1a表达量最高(P＜0.05)。作用时间在0.5 h HIF-1a表达达峰值，到4h下降至最低，随后又增高(P＜0.05); COX-2蛋白表达变化趋势与HIF-1a基本一致(P＜0.05)。大黄素可抑制LPS诱导的HIF-1a、COX-2、Phospho-IκB-a和Phospho-NF-κB p65的表达，并有明显量效关系(P＜0.05)。<br>　　2.PCR检测LPS刺激后HIF-1a的mRNA水平增高，而大黄素抑制其增高。<br>　　3.MTT法检测大黄素浓度在0-80μmol/L对细胞增殖无明显影响(0.95±0.02,0.89±0.03,0.88±0.04,0.91±0.03,0.83±0.03, P＞0.05)。虽然大黄素在此浓度范围产生了生物学效应，但对细胞基本无药物毒性。<br>　　四、结论<br>　　LPS激活肠上皮细胞HIF-1a—COX-2信号通路，且具有时间和剂量依赖性。大黄素可能通过阻断LPS—HIF-1a—COX-2的缺氧通路和LPS—IκB-a—NF-κB—COX-2的炎症通路，对肠上皮细胞起到保护作用。