摘要由于腺病毒伴随病毒(Adeno-associated Virus AAV)不同于其它病毒的一些特点,使其成为基因治疗病毒载体研究的热点.AAV是一种复制缺陷型DNA病毒,它的裂解性感染需要辅助病毒的参与;它不引起人类疾病;它宿主范围广,可以感染分裂期和静止期细胞;无辅助病毒存在时,其基因组能定点整合到人19号染色体19q13.4-ter上,利用这个特点有可能将外源基因定点整合至细胞染色体并且可以长期表达.首先构建了一种包含HSV-1包装信号和复制信号以及AAV Rep,Cap基因的嵌合载体pHSV-AAV,该载体在HSV-1辅助病毒存在时,质粒在细胞中滚环复制并以头尾相接的多拷贝串连体(Concatenate)的形式被包装进HSV-1毒粒中而成为一种复制缺陷的假型病毒.HSV-1辅助病毒本身亦能复制和包装,得到一种混合病毒HSV/AAV,它既含HSV-1辅助病毒,又含有带多拷贝AAV Rep,Cap基因的HSV-1假型病毒.当此混合病毒感染细胞时,前者可充当重组AAV包装的辅助病毒,后者可表达出AAV复制和包装所必需的反式蛋白,当细胞转染了重组AAV载体时,就可产生具有感染性的重组AAV病毒.并且其产生的重组AAV滴度比传统方法提高10倍以上.
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