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桦褐孔菌三萜的提纯及纳米粒制备

摘要本文对桦褐孔菌中的三萜类化合物进行了提取工艺、抗氧化活性及其聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒的制备工艺研究,成功制备了桦褐孔菌总三萜提取物聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒制剂。<br>  首先,采用超声辅助-回流提取法提取桦褐孔菌中的三萜类化合物,分光光度法进行含量测定。在单因素实验的基础上,以总三萜得率为评价指标,按照三因素三水平正交实验设计表进行提取工艺的优化,确定了最优提取工艺条件为:提取溶剂异丙醇,物料比1∶10,提取温度80℃,提取时间2h,提取1次。对该最佳工艺进行验证实验,平均得率为1.473%,相对标准偏差RSD为0.48%,结果稳定、重现性好,表明该工艺合理可行。桦褐孔菌总三萜粗提物,经过一系列纯化工序后,得到的总三萜提取物为淡黄色粉末或片状物,有光泽,纯度为80.56%。<br>  其次,对前面提取纯化得到的桦褐孔菌总三萜提取物进行了体外抗氧化活性研究。以经典抗氧化剂Vc为对照,采用化学模拟体系研究其体外抗氧化活性。总还原能力测定结果表明,桦褐孔菌总三萜提取物具有一定的还原能力,是良好的电子供应者,具有抗氧化活性;能有效清除羟自由基、超氧阴离子自由基及DPPH自由基,且清除率与样品质量浓度间存在一定的剂量依赖关系,即随着样品质量浓度的增加,清除能力增强。通过与经典抗氧化剂Vc相比较,证明桦褐孔菌的总体抗氧化能力比较好。<br>  再次,采用界面聚合法制备桦褐孔菌总三萜聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒。在单因素实验考察处方及工艺因素的基础上,以包封率为主要评价指标,采用正交设计优化制备工艺,确定了最优制备工艺为:取15 mg桦褐孔菌总三萜提取物和50μL BCA单体溶于2mL乙醚中,作为油相;另取100mg由泊洛沙姆188和右旋糖酐70组成的的混合稳定剂溶解在10mL蒸馏水中,作为水相。在室温磁力搅拌的条件下,将油相缓慢加入水相中,持续搅拌一定时间,即得带有淡蓝色乳光的IOT-PBCA-NP胶体溶液,冷藏备用。<br>  最后,对采用最优处方工艺制备的桦褐孔菌总三萜聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒进行了质量评价。扫描电镜图显示制得的纳米粒外观圆整、大小均匀、无黏连、分散性良好。粒径分布较窄,基本呈正态分布,平均粒径为113 nm,多分散系数PI值为0.128,稳定性良好。Zeta电位为-16.0mV,平均包封率为77.68%。体外释放度实验结果表明,Weibull分布函数的拟合度最高,释药曲线拟合方程为lnln[1/(1-Q)]=0.6151 lnt-1.4308,相关系数r2=0.9869,具有明显的缓释作用。于室温条件下保存30天基本稳定。质量评价结果进一步表明了第四章中采用正交试验筛选出的IOT-PBCA-NP最优制备工艺稳定可靠。本文采用界面缩聚法制备了稳定的桦褐孔菌总三萜聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒,可口服亦可静脉注射。该纳米制剂粒径小且分布均匀,能达到缓释长效无刺激的目的。

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