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摘要背景：膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤，也是全身十大常见肿瘤之一。占我国泌尿生殖系肿瘤发病率的第一位，在西方其发病率仅次于前列腺癌，居第2位。然而，目前的研究仍然对膀胱癌的发生以及进展的机制缺乏足够深入的理解。现在可以明确的是，膀胱癌发生及进展是一个多因素涉及、多基因参与、多步骤形成以及多途径变化的过程，异常基因型的基础在外在高危因素的作用下逐渐积累，最终出现表型的恶形。miRNA是近年来研究比较热点的一类由内源基因编码的非编码RNA单链分子，长度约为20-24个核苷酸。人们已经认识到这些普遍存在的小分子在真核基因表达调控中有着广泛的作用。miRNA的水平在不同组织、不同发育阶段中有显著差异，呈现具有分化的位相性和时序性。对于各类疾病，尤其是肿瘤而言，miRNA也出现了时间和空间上的表达异常，本研究希望在膀胱癌中寻找这样的异常表达，并发现其在基因调控中扮演的作用。<br>　　目的：在膀胱癌患者手术切除的标本组织中采用Real Time PCR的方法检测miR-101的表达情况;体外实验中根据一系列实验方法鉴定miR-101在膀胱癌T24细胞株中的生物学功能。并且，通过生物信息学对miR-101作用靶点进行预测，并行生物学实验验证。<br>　　方法：⑴在20对配对的膀胱癌组织标本检测miR-101的相对表达量，对膀胱癌组织及对照的正常粘膜组织中miR-101的表达差异进行统计，并分析不同病例级别与分期的膀胱癌中miR-101的表达情况;⑵使用对膀胱癌T24细胞株转染miR-101 mimic使其过表达的方法进行一系列功能实验。通过CCK-8、平板克隆形成、流式细胞周期和凋亡检测、划痕愈合实验和Transwell小室法等手段来分析上调miR-101的表达对细胞增殖及迁移侵袭能力带来的影响;⑶使用在线软件对miR-101进行靶基因预测，然后利用Real Time PCR，WesternBlot等验证靶基因mRNA以及蛋白表达量是否相应变化，并利用荧光素酶双报告系统对miR-101的靶序列进行鉴定，使用拯救实验进一步验证miR-101的作用靶基因。<br>　　结果：①收集的20例膀胱癌癌组织标本中，有19例为miR-101相对低表达，占95％。癌组织中miR-101表达量平均约癌旁组织的1/2。肌层浸润性膀胱癌与非肌层浸润性膀胱癌以及高级别膀胱癌与低级别膀胱癌在miR-101的相对表达量的平均值有差异，但未能有统计学上的显著性意义。②膀胱癌T24细胞株和正常的膀胱移行上皮细胞株SV-HUC-1相比，miR-101也表现为低表达。③体外转染miR-101 mimic至膀胱癌T24细胞株使miR-101过表达，50nM浓度可以抑制细胞增殖活力。体外平板克隆形成实验未能明显抑制细胞克隆形成。划痕愈合实验和Transwell小室等实验显示miR-101过表达可以减弱T24细胞的迁移和侵袭能力，但对细胞周期和凋亡无明显影响。④通过在线软件的分析，预测c-Met可能是miR-101的靶基因，同时通过RealTime PCR和Westem Blot实验检测到c-Met在过表达miR-101后mRNA水平和蛋白水平都有下调。接下来的荧光素酶双报告系统分析证实c-Met是miR-101的直接作用靶点，其3'-UTR中存在miR-101调控的作用序列。<br>　　结论：⑴膀胱癌组织中miR-101与癌旁对照组织相比，相对表达量较低。但是本研究未能提示miR-101表达量高低与膀胱癌的恶性程度相关。⑵体外转染miR-101 mimic使miR-101过表达削弱了膀胱癌T24细胞株的增殖能力，但对克隆形成及细胞周期凋亡无明显影响。⑶miR-101的直接靶基因是c-Met，并影响下游ERK1/2蛋白的磷酸化水平。