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摘要乙型肝炎病毒能引起人类乙型病毒性肝炎，采取早期干预措施减轻肝炎，对于降低“病死率”具有重要意义。巨噬细胞通过释放促炎细胞因子在炎症中起着重要作用。高迁移率族蛋白1(HMGB1)以主动方式从活化巨噬细胞释放出去，是一个重要晚期致炎因子。<br>　　本课题旨在用LPS活化巨噬细胞体外模型筛选较优抗炎化合物，进一步研究其抗炎作用是否与HMGB1有关并对其机制进行探析。<br>　　本论文分为以下四个部分:<br>　　第一部分较优抗炎化合物的筛选<br>　　目的：从40种化合物中体外筛选较优抗炎化合物。<br>　　方法：RAW264.7细胞经不同浓度的LPS和/或化合物处理24小时后，用ELISA或Griess法检测上清液中NO、TNF-α和/或IL-6等指标水平，确定LPS剂量并筛选较优抗炎化合物。<br>　　结果：1、在合适LPS剂量范围内，暴露于LPS的RAW264.7细胞中NO、TNF-α和IL-6显著升高，且呈剂量依赖性。2、筛选出白藜芦醇(Res)和紫草素(Shik)等7种较优抗炎化合物，均能显著下调NO和TNF-α表达。3、Res和Shik剂量依赖地下调NO和TNF-α表达。<br>　　结论：1、筛选出7种较优抗炎化合物;2、Res和Shik具有较好剂量依赖抗炎效果。<br>　　第二部分白藜芦醇(Res)减轻炎症作用并减少RAW264.7细胞中LPS诱导的HMGB1和TLR4的表达。<br>　　目的：研究Res抗炎作用及机制。<br>　　方法：暴露于不同剂量LPS24小时的RAW264.7细胞，同时经Res或不经Res处理后用ELASA或Griess法测定上清液中TNF-α、IL-6、NO水平，并用qRT-PCR及Western Blot试验检测HMGB1和TLR4表达。<br>　　结果：1、Res显著减少IL-6，NO和TNF-α表达。2、Res显著减少HMGB1和TLR4表达。<br>　　结论：1、Res能阻断LPS诱导RAW264.7细胞的炎症效应。2、HMGB1表达下调是Res的作用机制之一。3、Res也可影响HMGB1-TLR4信号通路。<br>　　第三部分紫草素(Shik)通过IFN-β和NF-κB信号通路抑制LPS诱导的RAW264.7细胞HMGB1的释放。<br>　　目的：研究Shik的抗炎作用及机制。<br>　　方法：暴露于不同剂量LPS24小时的RAW264.7细胞，同时经Shik或不经Shik处理后用ELISA或Griess法测定上清液中TNF-α、IL-6、NO水平，并用qRT-PCR、ELISA或Western Blot试验检测HMGB1、IFN-β和细胞核对细胞质NF-κB比率表达。<br>　　结果：1、Shik能显著减少IL-6，NO和TNF-α表达。2、Shik显著减少LPS组HMGB1、IFN-β表达和细胞核对细胞质NF-κB蛋白表达比率。3、IFN-β信号分子JAK和NF-κB抑制剂显著减少HMGB1表达。<br>　　结论:1、Shik拮抗LPS引起RAW264.7细胞炎症应答;2、下调HMGB1表达是Shik抗炎机制之一，这与IFN-β和NF-κB信号通路有关。<br>　　第四部分白藜芦醇(Res)和紫草素(Shik)通过调节HMGB1发挥抗炎作用的体内研究<br>　　目的：研究Res和Shik在肝衰竭小鼠抗炎作用。<br>　　方法：用H&E染色观察半乳糖胺(GalN)/LPS急性肝衰竭小鼠肝损伤情况，检测血清ALT/AST，和用ELISA检测HMGB1水平。<br>　　结果：1、GalN/LPS组ALT/AST显著升高，且肝损伤明显。2、与模型组相比，Res治疗组ALT/AST未显著降低，且肝损伤明显。3、Shik治疗组ALT/AST显著降低，且肝损伤减轻，但小鼠血清HMGB1水平无显著变化。<br>　　结论：1、成功建立肝衰竭小鼠模型。2、Res无显著体内抗炎作用。3、Shik具有一定体内抗炎作用，但未显著下调血清HMGB1水平。