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摘要蛋白质是生物体行使功能的最重要的生物大分子之一，研究蛋白质在生理过程中的作用机制能够帮助我们更好的了解生命的意义。大部分蛋白质功能的实现依赖着其动态变化，核磁共振由于能够研究生物大分子在不同时间尺度上的运动特性而成为研究蛋白质动力学和作用机制的重要工具。本文应用生物化学方法分析了植物激素脱落酸(ABA)在拟南芥中的水溶性受体家族RCAR1/PYR/PYL中的成员PYL10对其下游信号因子2C类蛋白磷酸酶PP2C的作用机制。纠正了前人因偶然因素得出“PYL10是一类不依赖于ABA的受体”的结论。本文还进一步应用液体核磁共振弛豫测量和约化谱密度函数分析方法揭示了PYL10在ABA结合前后的动态特性，表明PYL10在结合ABA之后使得其结构熵和蛋白质柔性的增加。同时，本文还介绍了发展和应用无标记（Label-Free）质谱定量检测的方法研究大肠杆菌酪氨酸激酶C端酶活结构域(ETK-CTD)在磷酸化过程中的关键位点Tyr574的磷酸化水平的动态变化的工作，及简要介绍了植物内向整流钾离子通道KAT1的初步电生理研究。<br>　　第一章先简要介绍了ABA受体的发现和分类。接着对水溶性的ABA受体RCAR1/PYR/PYL家族介导的ABA信号通路的主要内容及其在植物体中的重要功能、RCAR1/PYR/PYL家族ABA受体结合ABA时的结构变化和发挥作用的机制进行了重点介绍。<br>　　第二章主要介绍了基于液体核磁共振自旋弛豫的蛋白质动力学分析方法，并相关研究表明热力学原理和动力学的结合能够更好地解释蛋白质-配体或者蛋白质-蛋白质相互作用机制。<br>　　第三章介绍了采用钼酸盐与磷酸根的显色反应检测PYL10在体外对PP2C(HAB1)磷酸酶活性的抑制，发现了与之前报道的结果（ABA非依赖性）相反的结果，即ABA依赖性，且这种依赖性会受到外源蛋白牛血清蛋白(BSA)的影响。生化分析结果表明PYL10和BSA不能形成稳定的复合物。<br>　　第四章针对BSA不是通过与PYL10直接相互作用影响其功能，可能是使PYL10蛋白的动力学发生了变化而对功能产生影响。我们对自由状态的PYL10(apo-PYL10)和结合有ABA的PYL10(ABA/PYL10)进行了液体核磁共振主链归属、弛豫数据的采集和约化谱密度函数分析以及ABA滴定实验，结果表明PYL10对PP2C的磷酸酶活性抑制作用是通过ABA介导的主链柔性以及构象熵的增加实现的。<br>　　第五章我们分别采用Label-Free质谱相对定量和Western-blot定性分析了ETK-CTD在磷酸化过程中自磷酸化位点Tyr574磷酸化水平的变化和蛋白质总磷酸化水平变化。质谱结果表明，ETK-CTD的Tyr574位点的磷酸化很快达到一个较低的稳定水平(1％);而Western-blot结果显示，在Tyr574达到这个稳定水平后蛋白总体磷酸化依然升高最后保持稳定，表明仅仅一个很低水平的自磷酸化（大约1％）已经足够使得蛋白质本身完成交叉磷酸化并使蛋白达到一个稳定的磷酸化水平。<br>　　第六章简单介绍了一些植内向整流钾离子通道KAT1的前期工作。