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摘要研究背景和目的:<br>　　肾间质纤维化（Renal interstitial fibrosis，RIF）是各种慢性肾病随病程进展到最终阶段的相同病理生理表现，严重威胁着患者健康。该病变表现肾间质中肌成纤维细胞显著增殖，细胞外胶原分泌增多，肾单位损伤及功能进行性下降为特征。因此，为探索行之有效的防治措施，需彻底明确该病变机制。肌成纤维细胞的来源一直是本病变探讨的焦点，相关文章表明，其来源或许涉及多种细胞。长期以来，肾小管上皮细胞-间叶细胞转分化（Epithelial-mesenchymal transition，EMT）机制得到众多学者首肯，但近来有学者提出不同观点，认为RIF与受Hh信号通路调节的周细胞的关系似乎更大。因此，本研究拟通过对Hh信号通路激活时周细胞各项特征变化的检测来探索Hh信号通路是否参与了周细胞向肌成纤维细胞方向转分化，并且是否可以被Hh信号通路的相应配体所干预。<br>　　材料与方法:<br>　　选用健康BALB/c乳鼠，雌雄不限，通过乳鼠肾细胞原代培养，用免疫磁珠分选技术分离纯化，并将所获得的细胞通过形态学观察和免疫细胞化学NG2、SMA和CD31检测，鉴定是否符合周细胞特征，经三次传代培养，收集周细胞。将已经纯化的周细胞分为对照组、SHH组和SHH+CPA组三组。对照组均于0h、24 h分别加终浓度为0.2％BSA的PBS; SHH组于0h、24 h分别加终浓度为1.5ng/mL SHH蛋白;SHH+CPA组在SHH组基础上于每个SHH的添加时间点前2h加终浓度为0.25μm/mLCPA干预。干预结束后，均行免疫细胞化学SMA检测、BrdU掺入实验检测、细胞划痕实验检测和Ⅰ型胶原ELISA检测。<br>　　结果:<br>　　1.通过乳鼠肾细胞原代培养，免疫磁珠分离纯化，经倒置相差显微镜观察，形态学符合周细胞特征:细胞宽大扁平，形状不规则，并伴数个突起，胞核居中，单核或双核;NG2和SMA免疫细胞化学染色阳性表达，CD31免疫细胞化学染色阴性表达，证实为周细胞。<br>　　2.细胞经干预行上述检测，免疫细胞化学SMA检测:对照组细胞质中阳性表达程度为121.3±13.7，SHH组为168±21.0，SHH+CPA组为132.1±19.8，即SHH组阳性表达程度高于对照组，SHH+CPA组阳性表达程度低于SHH组，差异比较均有统计学意义(P＜0.05);细胞划痕实验检测:对照组细胞迁徙距离24h、36h和48h分别为8.2000±1.4832μm、16.8000±1.0955μm、25.4000±1.1402μm，SHH组分别为15.6000±2.0736μm、21.8000±1.9235μm、35.2000±0.8367μm， SHH+CPA组分别11.4000±1.9494μm、18.4000±1.5166μm、28.2000±0.4472μm，即相同时间点SHH组细胞迁徙距离多于对照组，SHH+CPA组细胞迁徙距离少于SHH组，差异比较均有统计学意义(P＜0.05); BrdU掺入实验检测:对照组增殖活性为0.52±0.11，SHH组为0.67±0.12，SHH+CPA组为0.55±0.09，SHH组细胞增殖活性高于对照组，SHH+CPA组细胞增殖活性低于SHH组，两组差异比较均有统计学意义(P＜0.05);Ⅰ型胶原ELISA检测:对照组为5.36±0.52，SHH组为9.22±0.68，SHH+CPA组为7.8±0.63，即SHH组细胞产生Ⅰ型胶原的量多于对照组，SHH+CPA组细胞产生Ⅰ型胶原的量少于SHH组，两组差异比较均有统计学意义(P＜0.05)。<br>　　结论:<br>　　1.利用免疫磁珠分选法可以成功分离纯化肾脏周细胞并继续培养。<br>　　2.SHH可以通过上调Hh信号通路而促进肾周细胞向肌成纤维细胞方向发生表型转化。<br>　　3.CPA可以抑制上述表型转化的程度。