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摘要上皮性卵巢癌的死亡率在妇科肿瘤中居第一位，其复发率高、早期诊断率低。和其他恶性肿瘤一样，卵巢癌是多因素起因、多步骤发展，在微环境的共同作用下，形成的复杂组织，在分子水平上存在高度异质性。所以临床中组织形态和治疗方法相同的患者，其分子遗传学会不尽一致、临床预后也会不同。随着分子研究的日益进步，本课题首先通过对肿瘤增殖、抗凋亡、诱导血管形成、浸润、转移、免疫相关分子进行研究，并与临床病理特征、治疗效果和预后相结合，探讨其在临床中的应用价值。肿瘤相关巨噬细胞(TAM)作为机体对肿瘤免疫的第一道防线，可以分为M1和M2型，它们对不同类型的卵巢癌及预后会产生不同的影响，关于这方面作用及作用机制的研究目前还是空白。TP53蛋白是维持基因组稳定的一个关键分子。当染色体分离异常或DNA序列发生化学损伤时，TP53能够阻止细胞进入分裂周期，并诱导细胞凋亡。在96％的高级别浆液性卵巢癌患者中存在TP53基因的缺失或突变。所以本课题对TP53与卵巢癌的预后、耐药性也进行了相关研究。随后本研究对临床病理特征和以上的分子进行预后的多因素回归分析，建立了三个卵巢癌预后模型，并通过独立验证组对三个模型进行临床灵敏度和实用性检测。旨先对患者进行预后评估，再予以个体化的治疗以提高卵巢癌的治疗疗效。<br>　　第一部分肿瘤及免疫相关分子对上皮性卵巢癌临床诊断和预后的价值分析<br>　　研究目的:<br>　　研究肿瘤增殖、抗凋亡、诱导血管形成、浸润、转移相关分子对卵巢癌临床病理特征、治疗效果和预后的影响，探讨TAM的极化分型与卵巢癌病理特征和预后的相关性及TAM分型影响卵巢癌预后的可能作用机制。<br>　　研究方法:<br>　　1.使用单变量分析法分析卵巢癌临床病理特征对总生存期的影响;<br>　　2.免疫组化方法检测肿瘤相关分子在卵巢癌组织中的表达情况，并分析其对临床病理特征、化疗、预后的相关性;<br>　　3.分别用免疫荧光和流式细胞学方法检测卵巢癌组织的癌巢和间质中TAM及其分型的表达情况，分析其与临床病理特征及预后的相关性;<br>　　4.免疫组化方法检测卵巢癌中高表达MUC2与TAM分型的关系。免疫荧光方法分别检测卵巢癌组织中MUC2、TAM及COX-2的表达情况和组织中TAM分型与COX-2表达之间的关系。<br>　　研究结果:<br>　　1.产次、CA125、腹膜转移、FIGO分期、肿瘤分级、肿瘤残余灶、铂类耐药对总生存期有显著影响(p＜0.05)。卵巢癌分级系统（低级别或高级别）对卵巢癌预后的评估价值优于WHO分级(ROC:0.815 vs.0.787)。<br>　　2.P53、VEGF、GDF15、Her2、Kras、PTEN、Brca1、Brca2、Notch3、b-raf、EGFR对总生存期有显著影响(p＜0.05)。铂类药物耐药与否、残余灶大小、VEGF、Brca1、Her2、Kras是影响相同FIGO分期、相同组织学类型、并经过相同治疗后预后则不同的卵巢癌患者的因素。Her2、Kras、PTEN与铂类耐药有关。<br>　　3.肿瘤组织及其癌巢、间质中TAM的密度随FIGO分期和病理分级升高而增加;肿瘤组织中的M1/M2比值随分期的增加而降低。肿瘤组织中、癌巢中M1的密度和M1/M2比值与卵巢癌的预后有显著相关性。<br>　　4.高表达MUC2的癌巢组织中，M1的密度低，M1/M2比值低，TAMCOX-2、TAMCOX-2/TAM比值升高，M1型COX-2的表达相应降低，对应组织中的PGE2的表达量明显升高。<br>　　结论:<br>　　P53、VEGF、GDF15、Her2、Kras、PTEN、Brca1、Brca2、Notch3、b-raf、EGFR与卵巢癌的临床病理特征和预后相关。肿瘤组织中、癌巢中M1的密度和M1/M2的比值、COX-2+TAM和COX-2是卵巢癌预后的独立影响因素，MUC2是影响TAM分型的重要因素之一。<br>　　第二部分TP53基因分析在上皮性卵巢癌分子诊断中的价值研究<br>　　研究目的:<br>　　研究TP53基因在卵巢癌临床诊断、化疗耐药和预后评估中的价值。研究方法:<br>　　1.采用免疫组化检测P53突变情况，分析其与临床病理特征、化疗耐药与生存期的相关性;<br>　　2.采用免疫组化对相关分子进行检测，对P53联合其他分子共同预测卵巢癌预后的价值进行分析;<br>　　3.通过免疫组化、DNA定量检测、流式细胞周期检测，探讨P53突变与肿瘤细胞核染色体异常的相关性。并通过P53突变对MDR1拷贝数（FISH方法检测）的影响来研究P53突变患者的耐药机制。<br>　　研究结果:<br>　　1.单变量分析中，P53的突变与分期(p=0.024)、腹膜转移(p=0.027)、肿瘤分型(p=0.002)有统计学相关性。二次化疗后，突变组中TP方案耐受者（部分缓解、无缓解）明显高于野生组(p=0.005)。P53突变型的总生存率明显低于野生型(p=0.019)。<br>　　2.P53与CCNE1(p=0.036)、与FOXM1(p=0.045)、与Brca1(p=0.006)或Brca2(p=0.02)、与PTEN(p＜0.01)联合对卵巢癌生存预后的价值分析高于单一P53检测法。<br>　　3.P53突变组中，癌细胞核DNA异常（细胞核增大、异倍体数）明显高于野生组(p=0.0273，p=0.0432)，其中的MDR1的基因拷贝数也明显增加(p=0.0132);在卵巢癌复发患者中，P53突变组的MDR1表达升高者占89％(p＜0.01)。<br>　　结论:<br>　　联合检测能提高P53对生存期预测的准确性。P53突变是化疗后复发的独立影响因素。P53突变的癌细胞，其DNA差异性显著增强，细胞核大小更为悬殊，MDR1异常拷贝数增加和拷贝数异常的癌细胞增多。<br>　　第三部分上皮性卵巢癌分子预后评价模型的建立和验证<br>　　研究目的:<br>　　建立结合分子分型的卵巢癌预后评估模型，并对其临床应用特异性进行验证。<br>　　研究方法:<br>　　通过COX回归分析，建立基于临床病理特征、分子分型及临床病理特征结合分子分型的卵巢癌预后评估模型。对三个模型进行验证组独立验证，寻找出最佳的预后评估模型。<br>　　研究结果:<br>　　三个卵巢癌预后评估模型中，临床病理特征结合分子分型的预后评估模型，其ROC值最高[0.942 vs.0.869（临床病理特征模型）vs.0.884（分子模型）];相应的各模型内低、高风险组间的K-M生存分析显示，联合模型组的统计学意义最显著。<br>　　结论:<br>　　临床病理特征结合分子分型的卵巢癌预后评估模型更能准备地预测卵巢癌患者的生存预后。