换一批
换一批摘要基因疫苗是近年出现的一种新型疫苗,可诱发机体产生体液免疫和细胞免疫,然而其弱点是在人体免疫中用量大,诱发的免疫强度弱,其原因之一是外源基因表达水平较低.因此,构建高表达载体非常重要.脊髓灰质炎病毒(PV)是正链RNA病毒?其cDNA具有感染性.研究表明,在其cDNA载体中,只要保留PV的调控元件和RNA聚合酶的有效表达,就可使基因在RNA水平上进一步复制和转录,从而提高外源基因的表达水平.为此,研究小组利用PV调控元件和RNA聚合酶基因,构建了可高效表达外源基因的复制型基因疫苗载体.将含有PV调控元件的5′NCR质粒,该质粒中基因表达由CMV启动子下游构建了pGREEN LANTERN-1-5′NCR质粒,该质粒中基因表达由CMV启动子和PV的5′NCR双重控制.从PV cDNA上PCR扩增出含RNA聚合酶的不同长度基因片段,以pSG5质粒为载体,分别构建了四个表达RNA聚合酶的质粒,经体外表达检测,证明pSG5-POL1.99和pSG5-POL2.03质粒可表达RNA聚合酶.这两个质粒分别与pGREEN LANTERN-1-5′NCR质粒组成两个复制型DNA载体系统.实验表明,表达PV RNA聚合酶的质粒与pGREEN LANTERN-1-5′NCR质粒共转染明显提高了报告基因表达水平,提示含5′NCR的转录物在RNA水平被进一步扩增.该研究构建的能高效表达外源基因的复制型DNA载体,为构建高表达基因疫苗提供了一个新的途径.
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