摘要[目的]:<br> 1.观察ox-LDL对THP-1源性巨噬细胞泡沫化的影响及其机制。<br> 2.观察荷叶生物碱对THP-1源性巨噬细胞泡沫化的影响。<br> 3.探讨荷叶生物碱对THP-1源性巨噬细胞PPARγ及CD36表达的影响。<br> [方法]:<br> THP-1细胞经80nmol/L的佛波酯(PMA)诱导24h后,使其分化为巨噬细胞。THP-1细胞分化为巨噬细胞后,随机分为四组:空白对照组(10%胎牛血清培养基)、ox-LDL组(含50mg/L ox-LDL的10%胎牛血清培养基)、荷叶生物碱组(含50mg/L荷叶生物碱及50mg/L ox-LDL的10%胎牛血清培养基)、ciglitazone组(含50μmol/L ciglitazone、50mg/L荷叶生物碱及50mg/L ox-LDL的10%胎牛血清培养基),除培养基成分不同外,其余培养条件一样。在37℃、5% CO2的条件下培养24小时后,采用油红O染色法检测THP-1源性巨噬细胞内脂质蓄积的程度,用Western Blot和R-T PCR技术检测PPARγ及CD36的蛋白和mRNA的表达水平。<br> [结果]:<br> 1.在显微镜下观察THP-1细胞经PMA诱导分化前后细胞形态的改变:THP-1细胞由悬浮生长、形状规则圆形变成贴壁生长、形状不规则梭形,并伸出伪足,分化为巨噬细胞。<br> 2.经油红O染色观察THP-1源性巨噬细胞内脂质蓄积情况:ox-LDL组与空白对照组相比,细胞内脂质蓄积明显增多,脂质颗粒体积变大,数量变多;荷叶生物碱组与ox-LDL组相比,细胞内脂质蓄积明显减少,脂质颗粒体积变小,数量变少;ciglitazone组与荷叶生物碱组比较,细胞内脂质蓄积情况无明显变化。<br> 3.经ox-LDL干预后,CD36和PPARγ表达的差异<br> RT-PCR结果示:ox-LDL组CD36的mRNA相对表达量(4.06±0.46)较空白对照组(1±0)明显增加(P<0.01),ox-LDL组PPARγ的mRNA相对表达量(2.13±0.16)较空白对照组(1±0)明显增加(P<0.01)。Western Blot结果示:ox-LDL组CD36的蛋白表达量(0.73±0.06)较空白对照组(0.30±0.03)明显增加(P<0.01),ox-LDL组PPARγ的蛋白表达量(1.10±0.05)较空白对照组(0.45±0.02)明显增加(P<0.01)。<br> 4.经荷叶生物碱干预后,CD36和PPARγ表达的差异<br> RT-PCR结果示:荷叶生物碱组CD36的mRNA相对表达量(0.40±0.05)较ox-LDL组(1±0)比较明显减少(P<0.01),荷叶生物碱组PPARγ的mRNA相对表达量(0.50±0.03)较ox-LDL组(1±0)比较明显减少(P<0.01)。Western Blot结果示:荷叶生物碱组CD36的蛋白表达量(0.53±0.04)较ox-LDL组(0.73±0.06)明显减少(P<0.01),荷叶生物碱组PPARγ的蛋白表达量(0.70±0.02)较ox-LDL组(1.10±0.05)明显减少(P<0.01)。<br> 5.经ciglitazone干预后,CD36和PPARγ表达的差异<br> RT-PCR结果示:ciglitazone组CD36的mRNA相对表达量(2.11±0.04)较荷叶生物碱组(1±0)比较明显增多(P<0.01),ciglitazone组PPARγ的mRNA相对表达量(3.04±0.10)较荷叶生物碱组(1±0)比较明显增多(P<0.01)。Western Blot结果示:ciglitazone组CD36的蛋白表达量(0.78±0.08)较荷叶生物碱组(0.53±0.04)明显增多(P<0.01),ciglitazone组PPARγ的蛋白表达量(1.25±0.07)较荷叶生物碱组(0.70±0.02)明显增多(P<0.01)。<br> [结论]:<br> 1.ox-LDL促进THP-1源性巨噬细胞的泡沫化,其机制是通过激活PPARγ的表达来上调CD36。<br> 2.荷叶生物碱抑制THP-1源性巨噬细胞的泡沫化,其机制是通过抑制PPARγ的表达来下调CD36。
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