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摘要目的:研究降脂颗粒及其有效成分对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的干预作用，并从NAFLD病理机制中两大作用靶点腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）介导的脂质代谢以及氧化应激入手，通过体内、体外实验探讨降脂颗粒治疗NAFLD的分子机理，为降脂颗粒的临床应用推广提供依据，并为开发治疗NAFLD的新型组分药物建立基础。<br>　　方法:<br>　　1.雄性C57BL/6J小鼠60只，按体重采用完全随机分组法分为正常组(C)和模型组(M)，动态观察小鼠造模4W、8W、12W、16W的血清学改变(ALT、AST、TG、TC、LDL-c、HDL-c和FFA)、病理组织变化以确定模型的建立，并检测部分相关分子蛋白表达。<br>　　2.证实NAFLD模型成功建立后，予降脂颗粒药物干预4周。测量正常(C)、模型(M)及降脂颗粒组(JZ)小鼠体重、肝重，并计算肝指数。检测血清转氨酶、血脂以及肝组织TC、TG含量。肝组织HE和油红O染色观察小鼠肝脏病理改变，用ELISA和PCR法检测血清细胞因子水平，用免疫组化检测肝脏脂质过氧化物4-HNE含量。<br>　　3.采用Western blot和Real-Time PCR检测降脂颗粒药物干预后AMPK介导的脂质代谢和氧化应激相关分子的mRNA和蛋白表达水平。<br>　　4.用游离脂肪酸诱导人肝癌细胞株HepG2细胞24h建立肝细胞脂肪变模型。检测细胞内TG、TC含量，结合油红O染色，证实肝细胞脂肪变模型建立。<br>　　5.采用CCK8试剂检测降脂颗粒有效成分不同浓度的细胞毒性，并筛选药物最佳有效剂量。肝细胞脂肪变模型用药物干预24h后检测细胞内TG、TC含量，并通过油红O和尼罗红染色及显微镜观察肝细胞脂肪变情况。<br>　　6.使用活性氧检测试剂测定细胞ROS水平，采用免疫化学方法检测细胞4-HNE含量。采用Western blot方法和Real-Time PCR的方法检测AMPK通路介导的脂质代谢和氧化应激相关分子表达。<br>　　结果:<br>　　1.小鼠造模动态观察:模型组小鼠在16周体重和肝重明显升高。血清ALT水平在16周升高，FFA的水平则显著降低。模型组8周、16周血清TC、HDL-c和LDL-c的水平均显著升高。肝脏HE染色提示模型组小鼠肝组织均出现不同程度的肝细胞脂肪变性，且随造模时间增加而加重，后期出现小叶炎症、局灶性坏死及肝细胞气球样变性。综合各项指标，表明高脂饲料诱导小鼠NAFLD模型的成功建立。<br>　　2.降脂颗粒对NAFLD小鼠药物干预作用:干预4周后，相对于模型组，小鼠体重和肝重明显下降;血清ALT和肝内甘油三酯(TG)水平下降，并且小鼠血清抵抗素及肝脏TNF-α和IL-1β的表达水平均明显下降。肝脏HE和油红O染色提示降脂颗粒可以改善小鼠脂肪变性、炎症和气球样变。<br>　　3.降脂颗粒组对NAFLD小鼠脂质代谢和氧化应激干预机制:干预4周后，相对于模型组，小鼠肝组织中AMPK蛋白表达水平下降，p-AMPK、p-ACC的水平均升高。其下游脂肪酸氧化分子AOX1水平升高，而脂肪合成相关基因SREBP1c的蛋白表达水平下降。相对于模型组，小鼠肝组织脂质过氧化物水平显著下调，对抗氧化的转录因子Nrf2和其下游分子GSTP1的mRNA水平均上升。<br>　　4.降脂颗粒有效成分对肝细胞脂肪变性干预作用:原人参二醇(P)、丹参酮ⅡA(T)、大黄素(E)和三种单体最佳配伍组(F)均可降低细胞内TG水平。油红O结合尼罗红染色镜下观察与TG结果一致。<br>　　5.降脂颗粒有效成分对脂肪变性细胞中脂质代谢和氧化应激干预机制:成分P降低细胞中AMPK、ACC表达水平，但升高p-AMPK和p-ACC表达水平;成分T升高p-AMPK水平;配伍F上调AOX1的表达;另外，成分P、T和E均降低CYP2E1蛋白水平。<br>　　结论:<br>　　1.降脂颗粒对高脂饮食诱导的程度较重的小鼠NAFLD具有降脂保肝的疗效。<br>　　2.通过调节AMPK信号通路和氧化应激改善NAFLD小鼠脂质代谢和减轻肝损伤是降脂颗粒治疗NAFLD的部分作用机制。<br>　　3.降脂颗粒的主要有效成分原人参二醇、丹参酮ⅡA、大黄素和单体配伍F可减轻肝细胞脂肪变性，其作用机理包括对AMPK信号通路以及氧化应激的调控。