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摘要目的：<br>　　氧化应激损伤能改变血管内皮细胞的结构和功能，加速血管老化，对动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）的形成与发展有着重要影响。补肾中药在延缓衰老的同时，具有抑制AS病变、保护血管内皮细胞的作用，但其有效成分及作用机制尚不清楚。近年研究表明p66Shc、Bax/Bcl-2对血管内皮细胞氧化应激损伤及凋亡的具有调节作用。本课题通过观察补肾中药单体对血管内皮细胞氧化应激损伤模型p66Shc、Bax/Bcl-2表达水平以及抗氧化物酶活性、氧化物含量的调节作用，探讨补肾中药干预血管内皮细胞氧化应激损伤的作用机制及单体，为今后研制单体明确的防治AS中药新药提供依据。<br>　　方法：<br>　　1.人脐静脉内皮细胞EA.hy926经不同浓度、不同时间过氧化氢(H2O2)刺激后，用western blot法检测p66Shc蛋白水平、qPCR法检测p66 mRNA表达水平、DCFH-DA染色法检测ROS含量、生化法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量、Elisa法及细胞化学染色法检测β-gal活性，建立H2O2诱导的血管内皮细胞氧化应激损伤模型。<br>　　2.京尼平苷酸、齐墩果酸、补骨脂素、芝麻素4种补肾中药单体处理血管内皮细胞氧化应激损伤模型24h后，采用qPCR法检测细胞内p66 mRNA的表达含量，并对p66mRNA2-△△Ct数值进行比较。<br>　　3.齐墩果酸处理血管内皮细胞氧化应激损伤模型24h后检测SOD活性、MDA含量，用western blot法检测p66Shc，Bcl-2，Bax，caspase-3蛋白的表达水平，qPCR法检测BAX、BCL-2 mRNA表达水平。<br>　　结果：<br>　　1.EA.hy926内皮细胞经12μM，25μM,50μM，100μM H2O2处理24h后，p66mRNA表达水平及p66Shc蛋白水平显著增加，且与空白对照组相比均有统计学差异(P＜0.05)。不同H2O2浓度中，以25μM诱导细胞内p66的表达最为明显。EA.hy926内皮细胞经25μM H2O2处理12h、24h、48h、72h后发现，24h时细胞内p66 mRNA表达水平及p66Shc蛋白表达水平高于空白对照组(P＜0.05)。<br>　　2.EA.hy926内皮细胞经25μM H2O2诱导24h后，与空白对照组相比β-gal活性增强、SOD活性降低、MDA含量升高、ROS含量增多。<br>　　3.3个浓度（5μM，50μM，500μM）的京尼平苷酸、齐墩果酸、补骨脂素、芝麻素处理血管内皮细胞氧化应激损伤模型后，与模型组相比p66 mRNA表达水平降低(P＜0.05)。其中以齐墩果酸作用效果较为明显。<br>　　4.齐墩果酸可以改善血管内皮细胞氧化应激损伤模型的细胞学形态，增高SOD活性，降低MDA含量，削弱p66Shc蛋白表达水平，提高Bcl-2/Bax比值，增高BCL-2 mRNA表达水平，降低BAX mRNA表达水平，减少caspase-3活性剪切体表达水平。<br>　　结论：<br>　　1.25μM H2O2刺激EA.hy926内皮细胞24h后，p66Shc表达水平升高且细胞内过氧化物含量增加、抗氧化物酶活性降低、β-gal活性升高，为血管内皮细胞氧化应激损伤模型。<br>　　2.京尼平苷酸、齐墩果酸、补骨脂素、芝麻素4种补肾中药单体能拮抗血管内皮细胞氧化应激损伤模型中p66 mRNA的含量。其中以齐墩果酸的作用效果最为明显。<br>　　3.补肾中药单体齐墩果酸可以提高抗氧化酶活性，降低氧化产物，并通过调节凋亡相关分子从而减少氧化损伤引起的凋亡，此过程可能与其调节p66Shc、Bcl-2/Bax的表达水平有关，提示齐墩果酸具有抗AS的潜力。