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摘要第一部分建立符合视网膜新生血管及血管发育状态的小鼠模型<br>　　背景及目的:氧诱导视网膜病变(OIR)动物模型的基本病理改变是在高氧环境下，未发育完全的视网膜血管闭塞，相应的视网膜缺血、缺氧，进而导致视网膜新生血管（RNV）形成。该模型符合RNV及血管发育状态，其表现类似于早产儿视网膜病变(ROP)。Smith的方法具有较好的可行性和重复性。因此本研究采用OIR小鼠模型构建RNV和视网膜血管发育状态。<br>　　方法:7日龄C57BL/6J幼鼠14只置于75％±2％浓度的高氧容器内连续饲养5天，随后在正常空气环境中饲养5天，作为OIR模型组;同龄C57BL/6J幼鼠10只在正常空气环境中饲养至17日龄作为空气对照组。两组小鼠分别行心脏FITC-dextran灌注及视网膜铺片，比较视网膜总面积、无灌注区面积、灌注区微血管网密度、新生血管簇面积、静脉扩张、动脉迂曲程度的差异;行眼球切片HE染色后比较突破内界膜的内皮细胞核的数目。<br>　　结果:与空气对照组比较，OIR模型组17日龄小鼠表现为视网膜总面积减小(60.7±1.5×105个像素值vs.54.5±5.2×105个像素值，P=0.0004)、后极部无灌注区面积扩大（0±0％ vs.25.5±5.4％，P＜0.0001），灌注区的微血管网密度异常增高(30.9±1.7％ vs.48.6±4.9％，P＜0.0001)，视网膜灌注区与无灌注区交界处新生血管簇面积扩大(0±0％ vs.2.6±1.3％，P＜0.0001)，静脉明显扩张（9.2±0.9个像素值vs.17.0±1.5个像素值，P＜0.0001)，动脉明显迂曲(1.02±0.01vs.1.14±0.04，P＜0.0001)。与空气对照组比较，OIR模型组突破内界膜的内皮细胞核数目增多(0.6±1.1 vs.49.6±6.8, P＜0.0001)。<br>　　结论:该模型符合RNV及视网膜血管发育状态，重复性好，可定量分析氧诱导视网膜病变严重程度和视网膜血管发育状态。<br>　　第二部分 Ang/Tie2与VEGF/VEGFR信号通路对视网膜新生血管及血管发育的作用研究<br>　　背景及目的:血管内皮生长因子（VEGF）及其受体(VEGFR)与血管生成素(Ang)及其受体(Tie2)是目前得到确认的最重要的血管生长相关因子。游离的Tie2融合蛋白(sTie2-Fc)和血管生成素-1(Ang1)可拮抗血管生成素-2（Angiopoietin-2，Ang2）的促新生血管作用。雷珠单抗（Ranibizumab，商品名Lucentis）是FDA批准的抗VEGF单克隆抗体。本研究分别随机单眼玻璃体腔注射磷酸盐缓冲溶液(PBS)、sTie2-Fc、Ang1、Ranibizumab、sTie2-Fc+Ranibizumab、Ang1+Ranibizumab,比较各种处理方案对RNV和视网膜血管发育的作用。<br>　　方法:7日龄C57BL/6J新生小鼠82只，分6组（C组14只、D组14只、E组13只、F组14只、G组14只、H组13只），置于氧浓度75％±2％浓度的容器内连续饲养5天，至小鼠12日龄时出氧箱，测量记录小鼠体重，随机单眼玻璃体腔内注射PBS(1μl)（C组）、sTie2-Fc（1μl含0.05μg）（D组）、Ang1（1μ1含0.05μg）(E组)、Ranibizumab（1μl含5μg）（F组）、sTie2-Fc+Ranibizumab(1μl含sTie2-Fc0.05μg和Ranibizumab5μg)(G组)、Ang1+Ranibizumab(1μl含Ang10.05μg和Ranibizumab5μg)（H组）。再置于空气环境中饲养至17日龄，再次测量记录小鼠体重，然后处死。每组小鼠分别行心脏FITC-dextran灌注及视网膜铺片和眼球切片HE染色。<br>　　结果:<br>　　1.与PBS组比较，sTie2-Fc组、Ang1组、Ranibizumab组、sTie2-Fc+Ranibizumab组和Ang1+Ranibizumab组铺片中新生血管的面积均减小(P值分别为＜0.0001、＜0.0001、＜0.0001、＜0.0001和＜0.0001)，切片中突破内界膜的内皮细胞核数目亦减少(P值分别为＜0.0001、＜0.0001、＜0.0001、＜0.0001和＜0.0001）;sTie2-Fc+ Ranibizumab组和Ang1+Ranibizumab组对RNV的抑制作用增强。<br>　　2.与PBS组比较，sTie2-Fc组，Ang1组，Ranibizumab组和Ang1+Ranibizumab组铺片中无灌注区的面积均缩小（P值分别为＜0.0001、0.003、0.01和0.01），灌注区的微血管网密度均降低，其中sTie2-Fc组的无灌注区面积明显小于其他各组;sTie2-Fc+Ranibizumab组的无灌注区面积大于PBS组，灌注区的微血管密度进一步降低。<br>　　3.Ranibizumab组的视网膜总面积（P值分别为＜0.0001、0.02、＜0.0001、0.003和＜0.0001）和出生第17天的体重(P值分别为＜0.0001、0.008、0.001、0.01和0.02)明显低于其他各组。<br>　　结论:单独玻璃体腔注射sTie2-Fc、Ang1或Ranibizumab均可抑制RNV，不影响视网膜血管发育，其中sTie2-Fc甚至可以促进视网膜血管发育的进行。联合玻璃体腔注射sTie2-Fc+Ranibizumab或Ang1+ Ranibizumab，增强抑制RNV的作用，但是前者明显抑制视网膜血管发育，后者的影响较小。因此，应用sTie2-Fc调控Ang/Tie2信号通路可能是抑制RNV更好的选择，应用Ang1+Ranibizumab联合调控Ang/Tie2和VEGF/VEGFR信号通路，可能更安全。