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摘要本文主要从以下几个方面进行了论述:<br>　　第一部分 SD大鼠脂肪干细胞分离培养鉴定及大鼠急性缺血性肾损伤模型的建立。<br>　　目的:脂肪干细胞(adipose derived stem cells，ASCs)分离培养和鉴定;建立大鼠急性缺血性肾损伤（ischemic acute kidney injury）模型。<br>　　方法:采用Ⅰ型胶原酶消化法获取SD大鼠腹股沟处皮下脂肪组织中的ASCs，贴壁法纯化，倒置显微镜下观察细胞形态及生长过程，取第3代细胞用于实验。体外标准诱导下检测此类细胞成脂、成骨等多向分化能力，并以FCM仪检测其表面标志物CD29、CD90、CD34和CD45。以无创动脉夹持续夹闭双侧肾蒂45min的方法建立大鼠iAKI模型，并检测正常大鼠和iAKI大鼠再灌注24hr时的血肌酐(Scr)。结果:1.原代细胞呈短梭形或小多角形，贴壁集落生长，贴壁细胞经3次传代后，细胞大小及形态趋于一致，呈长梭形旋涡状、放射状生长。2.FCM鉴定ASCs细胞表面抗原。<br>　　结果：CD29和CD90高表达，CD34和CD45低表达，符合ASCs公认的免疫表型;在标准成脂诱导条件下，油红O染色可见脂肪滴证实其可向脂肪细胞分化;在标准成骨诱导条件下，VonKossa染色可见矿化结节证实其可向成骨细胞分化。3.ASCs传至第9代仍可保持平均每天1.33×104个的增值速度。4.正常大鼠血肌酐为41.67±5.92μmol/L，iAKI大鼠再灌注24hr时的血肌酐为261.99±5.091mol/L。<br>　　结论:1.通过Ⅰ型胶原酶消化法可获得较高纯度的大鼠ASCs，细胞贴壁生长并且高表达CD29和CD90，低表达CD34和CD45，符合公认的ASCs免疫表型。2.分离获得的ASCs在标准诱导条件下可诱导分化为成骨细胞、成脂细胞，多向分化潜能证实其为干细胞。3.大鼠腹股沟处皮下脂肪组织中提取的ASCs自我更新能力旺盛，传至第9代仍可保持较快增殖速度。4.iAKI大鼠24hr时血肌酐较正常大鼠显著升高(P＜0.05)，iAKI模型建立成功。<br>　　第二部分 经左侧肾动脉移植ASCs对大鼠急性缺血性肾损伤的治疗作用研究。<br>　　目的:探讨经左侧肾动脉移植ASCs对大鼠急性缺血性肾损伤（iAKI）的治疗作用。<br>　　方法:持续夹闭SD大鼠双侧肾蒂45min建立iAKI模型。将建模成功后的SD大鼠随机分成两组:对照组（再灌注后即刻经左肾动脉注射500μiPBS，n=30）、ASCs治疗组（再灌注后即刻经肾动脉移植5×105 ASCs，n=30）。术后12、24、48、72hr和1wk时处死大鼠，取血、分离血清，分别测定血清肌酐值，光学显微镜观察肾脏病理损伤及细胞凋亡、炎症反应及细胞增生情况，并进行肾小管间质损伤评分和统计学分析。<br>　　结果:1.ASCs治疗组Scr水平在各时间点均显著低于对照组(P＜0.05)。2.肾脏病理及肾小管间质损伤评分提示:与对照组相比，治疗组再灌注12、24和48hr时损伤显著减轻。3.与对照组相比，治疗组左侧肾脏TUNEL染色和巨噬细胞浸润染色积分再灌注12、24、48、72hr和1wk时显著降低(P＜0.05);核增殖抗原48hr时显著增加(P＜0.05)，72hr和1wk时减少(P＜0.05)。与治疗组右侧肾脏相比，治疗组左侧肾脏于再灌注后24hr肾小管间质损伤评分显著降低(2.40±0.50，P＜0.05)，再灌注后1wk时，肾组织TUNEL染色阳性细胞数减少(P＜0.05)，再灌注12、48、72hr和1wk时巨噬细胞浸润染色积分减少(P＜0.05)，再灌注后48hr时核增殖抗原表达增加(P＜0.05)，再灌注后72hr和1wk时核增殖抗原表达减少(P＜0.05)。<br>　　结论:ASCs经肾动脉移植可显著改善iAKI大鼠肾功能、减轻肾脏病理损伤和细胞凋亡、减少炎症细胞浸润、促进损伤后修复。此外，直接移植ASCs的左肾在细胞凋亡、炎症细胞浸润、损伤修复方面均优于右肾，提示ASCs进入受损部位或受损附近部位后发挥了重要作用。<br>　　第三部分 经左侧肾动脉移植后的ASCs在AKI大鼠体内分布情况。<br>　　目的:研究标记后的ASCs经大鼠左侧肾动脉移植后在AKI大鼠体内分布情况。<br>　　方法:选择CM-Dil标记ASCs，荧光倒置显微镜观察细胞染色情况。参照第二部分方法制作大鼠iAKI模型，再灌注后即刻经左肾动脉移植5×105 CM-Dil标记的ASCs，术后12、24、48、72hr和1wk时处死大鼠，制作冰冻切片，DAPI标记细胞核，荧光倒置显微镜观察肾、肺、肝、脾、心脏内的CM-Dil阳性细胞的分布情况，并计数不同时间点双侧肾脏单个肾小球内平均ASCs数量。<br>　　结果:1.ASCs肾内分布情况:CM-Dil阳性细胞主要分布于左侧肾小球内，其中移植后12hr和24hrASCs较多，48hr、72hr和1wk时ASCs数量逐渐减少;右肾所有时间点均未观察到CM-Dil阳性细胞。2.ASCs在肺、肝、脾、心脏的分布情况:48hr、72hr时肺内存在少量CM-Dil阳性细胞，12hr、24hr、1wk时未观察到CM-Dil阳性细胞;48hr肝内存在少量CM-Dil阳性细胞，其他时间点未观察到CM-Dil阳性细胞;脾脏和心脏在各时间点均未观察到CM-Dil阳性细胞。2.12hr、24hr、48hr、72hr、1wk时单个肾小球内CM-Dil阳性细胞计数分别为:6.33±1.75、5.67±1.15、4.5±1.05、3.43±1.06、2.5±1.29个。<br>　　结论:1.选择CM-Dil标记ASCs，进行体内示踪并观察其分布情况是可行的。2.经左侧肾动脉移植的ASCs全部分布在左侧肾小球内，右侧肾小球在各个时间点均未观察到CM-Dil阳性细胞。3.肾动脉移植途径可有效减少ASCs在其他脏器的滞留，提高归巢率，发挥治疗作用。