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摘要本文从以下两部分展开了论述：<br>　　第一部分 Ang-(1-7)对子痫前期足细胞损伤的保护作用<br>　　目的:<br>　　近年来肾素-血管紧张素系统(RAS)在子痫前期肾脏损伤中的作用被逐渐认识。Ang-(1-7)是RAS系统一个重要的活性七肽，主要作用于G-蛋白偶联的Mas受体发挥作用，在体内主要发挥拮抗AngⅡ的作用。许多研究显示足细胞的直接损伤参与了子痫前期蛋白尿的产生，提示子痫前期肾脏损伤是足细胞病。我们前期研究显示与正常妊娠孕妇相比，子痫前期患者血清及尿液中Ang-(1-7)水平降低，且其水平与足细胞损伤及蛋白尿的发生密切相关，表明循环及肾脏局部降低的Ang-(1-7)是子痫前期肾脏损伤的原因之一。在本研究中我们借助体外足细胞培养，诱导子痫前期体外足细胞损伤模型，进一步探讨Ang-(1-7)在子痫前期肾小球足细胞损伤中的作用。<br>　　方法:<br>　　应用体外细胞培养技术，培养条件性永生的人肾脏足细胞，收集子痫前期患者血清及正常妊娠孕妇血清刺激足细胞，并于子痫前期患者血清中加入不同浓度Ang-(1-7)与足细胞共孵育，应用CCK8试剂盒检测足细胞活性，Western blot检测足细胞Mas受体的表达，以及足细胞标志蛋白(nephrin、podocin、WT-1)的表达，免疫荧光观察足细胞骨架蛋白F-actin的变化，流式细胞仪检测足细胞的凋亡。加入Mas受体拮抗剂A779后，观察上述变化。<br>　　结果:<br>　　1.足细胞活性检测:与FBS孵育足细胞相比，正常妊娠孕妇及子痫前期患者血清干预足细胞均可使其活性降低，但都高于90％;在FBS中加入不同浓度 Ang-(1-7)(10-5，10-6，10-7M)及A779(10-5，10-6，10-7M)，足细胞活性没有明显变化。<br>　　2.Mas受体的表达:免疫印迹结果显示人足细胞株表达Mas受体。<br>　　3.足细胞标志蛋白表达的变化:与正常妊娠组比较，子痫前期组足细胞nephrin、WT-1蛋白表达降低(nephrin:0.42±0.04-fold VS0.64±0.07-fold of GAPDH，P＜0.005; WT-1:0.28±0.05-fold VS0.46±0.09-fold of GAPDH, P＜0.05),podocin蛋白表达未有变化。<br>　　4.不同浓度Ang-(1-7)对子痫前期足细胞标志蛋白表达的影响:在子痫前期患者血清中加入不同浓度的Ang-(1-7)，Ang-(1-7)在10-6M浓度对足细胞有最大保护作用，nephrin、WT-1表达增加(nephrin:0.57±0.07-fold VS0.42±0.04-foldof GAPDH,P＜0.05; WT-1:0.41±0.04-fold VS0.28±0.05-fold ofGAPDH,P＜0.05)。Mas受体拮抗剂A779可拮抗Ang-(1-7)对足细胞的保护作用，与PE+Ang-(1-7)相比，加入A779后，nephrin、WT-1表达减少（nephrin:1.55±0.20-fold VS2.1±0.19-fold of GAPDH,P＜0.01;WT-1:0.60±0.08-fold VS0.84±0.13-fold of GAPDH,P＜0.01)。<br>　　5.足细胞标志蛋白在基因水平的表达变化:与正常妊娠组相比，子痫前期组足细胞nephrin、WT-1在mRNA水平表达降低(nephrin:23.28±3.94 VS7.16±0.65,P＜0.005; WT-1:2.01±0.0.42 VS1.03±2.23, P＜0.05)。加入Ang-(1-7)后，nephrin与WT-1 mRNA表达增加(nephrin:12.78±3.89，P＜0.005; WT-1:2.23±0.29，P＜0.05)，A779可拮抗上述作用。<br>　　6.Ang-(1-7)对足细胞骨架蛋白F-actin的影响:与正常妊娠组比较，子痫前期组足细胞骨架蛋白F-actin表达减少，排列紊乱，子痫前期患者血清中加入Ang-(1-7)可缓解子痫前期患者血清引起的足细胞骨架重排。A779可拮抗Ang-(1-7)的作用。<br>　　7.Ang-(1-7)对足细胞凋亡的影响:与正常妊娠组(2.36±1.05％)比较，子痫前期组足细胞凋亡增加(8.55±0.68％，P＜0.001)。子痫前期患者血清中加入Ang-(1-7)后，足细胞凋亡明显减少（4.47±0.73％）。A779可拮抗Ang-(1-7)的作用。<br>　　结论:<br>　　Ang-(1-7)可缓解子痫前期患者血清引起的足细胞损伤。<br>　　第二部分 MAPK通路在Ang-(1-7)对子痫前期足细胞影响中的机制作用<br>　　目的:<br>　　丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases，MAPKs）是细胞内的一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，存在于大多数细胞内，能够将细胞外刺激信号转导至细胞及其核内，并引起细胞生物学反应（如细胞增殖、分化、转化及凋亡等）。研究证实，在大鼠肾小管近端细胞中，Ang-(1-7)可抑制AngⅡ诱导的ERK1/2，p38 MAPK与JNK的磷酸化。在肾脏内皮细胞中，Ang-(1-7)可抑制高糖诱导的蛋白合成及p38 MAPK的磷酸化。尽管已有研究证实足细胞可表达ACE2并且在体外培养中可以合成Ang-(1-7)，但Ang-(1-7)对足细胞信号通路的作用还未明确。因此本研究目的是探讨MAPK通路是否参与Ang-(1-7)对子痫前期足细胞的保护作用。<br>　　方法:<br>　　应用体外细胞培养技术，收集正常妊娠孕妇及子痫前期患者血清干预人足细胞，设立正常妊娠组，子痫前期组，子痫前期+ Ang-(1-7)、子痫前期+Ang-(1-7)+A779，正常妊娠组+A779进行实验，应用Western blot检测MAPK组分ERK1/2、p38、JNK磷酸化的变化。<br>　　结果:<br>　　1.MAPK通路变化:与正常妊娠组相比，子痫前期组p38、ERK1/2、JNK磷酸化增加(p-p38:1.69±0.20-fold VS1.08±0.16-fold of GAPDH, P＜0.005;pERK:1.92±0.35-fold VS1.04±0.26-fold of GAPDH, P＜0.005;pJNK:2.35±0.35-fold VS1,79±0.30-fold of GAPDH，P＜0.05)。子痫前期患者血清中加入Ang-(1-7)后，可以降低子痫前期患者血清诱导的p38、ERK1/2、JNK磷酸化增加(p-p38:1.23±0.18-fold VS1.69±0.20-fold of GAPDH，P＜0.05: pERK:1.14±0.25-fold VS0.87±0.18-fold of GAPDH,P＜0.01;pJNK:1.90±0.10-fold VS2.35±0.35-fold of GAPDH，P＜0.05)，A779可以拮抗这一作用。<br>　　2.各组细胞上清中AngⅡ浓度变化:与正常妊娠组相比，子痫前期组细胞上清中AngⅡ浓度降低(NP:97.10±6.18 VS PE:73.80±0.25，P＜0.05)，PE组加入Ang-(1-7)后，可使AngⅡ浓度进一步降低(PE+Ang-(1-7):63.90±67.54，P＜0.05)，并且A779可拮抗上述作用。<br>　　结论:<br>　　Ang-(1-7)可通过降低MAPK通路的磷酸化发挥对子痫前期足细胞损伤的保护作用。