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摘要胰腺癌是消化系统死亡率第一的恶性肿瘤，60-80％的患者就诊时已是中晚期，中位生存期仅4-6个月，5年生存率低于5％，这种情况50年来无显著改善，因此探寻胰腺癌的早期诊断标志物和预后评估因素具有重要意义。我们以前的工作发现，新基因URG11可促进肝癌的发生和胃癌的上皮-间质转化(EMT)，但其在胰腺癌中的作用与机制至今尚不明确。为研究URG11在胰腺癌中的作用与机制，我们首先在不同恶性程度和转移潜能的胰腺癌细胞系中检测URG11的表达，我们发现在恶性程度高、转移潜能大的胰腺癌细胞中URG11表达显著升高，这提示URG11与胰腺癌的发生和转移相关。通过RNAi下调胰腺癌细胞中URG11的表达，发现癌细胞增殖减弱，且出现EMT标志物的变化，进一步证实了我们的发现;为进一步阐明URG11在胰腺癌中的机制，我们进一步研究URG11低（过）表达之后，相关基因的变化，发现Nrf2的变化与URG11呈显著正相关。我们既往的报道发现，URG11可促进HIF-1α的表达，进而促进胃癌的EMT;前期预实验的结果显示，URG11可上调MDM2的表达，进而抑制抑癌基因p53和周期蛋白Cyclin D1的表达;基于我们的工作基础和前述发现，我们推断URG11通过Nrf2介导了胰腺癌细胞的增殖和EMT，为进一步明确信号转导途径，我们进行如下四部分的研究:<br>　　第一章 URG11在胰腺癌中高表达，促进胰腺癌的增殖<br>　　目的:观察URG11在人胰腺癌组织和细胞中的表达，初步探讨其与胰腺癌的关系和机制<br>　　方法:首先通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫印迹(Western blot)法检测胰腺癌细胞系中URG11的表达水平;其次，通过RNA干扰（RNAi）抑制URG11在胰腺癌细胞系中的表达，采用MTT法和克隆形成实验检测其对胰腺癌增殖的影响，并通过检测MDM2、抑癌基因和周期蛋白的表达证实其作用;然后，通过裸鼠荷瘤实验研究抑制URG11在体内对胰腺癌成瘤的抑制作用;最后，通过对人胰腺癌组织和癌旁组织标本进行qRT-PCR、Western blot和组织病理学(HE染色和免疫组织化学(IHC))检测证实URG11在胰腺癌中的高表达。<br>　　结果:(1)URG11在恶性程度高、转移潜能大的PANC-1和BxPC-3胰腺癌细胞中表达最高;(2)抑制URG11表达能显著抑制胰腺癌细胞的增殖和克隆形成，并可抑制MDM2和周期蛋白Cyclin D1、CDK4的表达，促进抑癌基因p53、p21的表达;(3) URG11被抑制的PANC-1细胞在裸鼠体内的成瘤能力受到显著抑制;(4) URG11在胰腺癌组织中表达显著高于对应的癌旁组织。<br>　　结论:(1)URG11在胰腺癌组织中显著高表达;(2)其作用可能是促进胰腺癌细胞的增殖;(3)初步机制可能是与上调MDM2，抑制抑癌基因p53、p21的表达，进而促进周期蛋白Cyclin D1、CDK4的表达相关。<br>　　第二章 URG11促进胰腺癌细胞的上皮-间质转化，是胰腺癌预后的判定因素<br>　　目的:分析URG11与胰腺癌预后的关系并初步探讨其机制。<br>　　方法:首先，通过细胞实验和RNAi研究探讨URG11与胰腺癌EMT的关系;其次，通过荷瘤胰腺癌裸鼠模型，证实URG11与胰腺癌EMT、预后的关系;最后，通过胰腺癌组织芯片免疫组化检测和临床资料统计分析，探明URG11与胰腺癌临床预后的关系。<br>　　结果:(1)过表达的URG11与胰腺癌组织的E-Cadherin降低、Vimentin升高有关;而下调URG11可使E-Cadherin表达升高、Vimentin表达降低，提示URG11可促进胰腺癌发生EMT;(2)抑制URG11表达导致胰腺癌细胞侵袭能力下降;(3)体内实验证实，抑制URG11表达可使PANC-1细胞荷瘤裸鼠的生存期延长，组织病理检测显示URG11与E-Cadherin表达呈负相关、与Vimentin呈正相关;(4)组织芯片检测和临床资料统计分析显示URG11与胰腺癌患者的生存期和术后复发率有关。<br>　　结论:URG11可能通过介导上皮-间质转化(EMT)促进胰腺癌转移，进而影响胰腺癌的预后。<br>　　第三章 URG11-Nrf2信号通路促进胰腺癌增殖和上皮-间质转化(EMT)的机制研究<br>　　目的:初步研究URG11促进胰腺癌发生发展的分子机制<br>　　方法:通过MTT法研究低表达和过表达URG11的胰腺癌细胞对过氧化氢损伤的耐受能力;通过qRT-PCR和Western blot检测URG11对抗氧化酶的影响;通过Luciferase和Western blot检测URG11对Nrf2转录和表达的影响;通过RNAi和启动子分析确定URG11、Nrf2、MDM2与HIF-1α之间的相关性，并用免疫组化法在胰腺癌组织中进行验证。<br>　　结果:(1)抑制URG11可下调抗氧化酶表达，加剧过氧化氢对胰腺癌细胞的损伤作用;高表达的URG11则通过促进抗氧化酶表达，拮抗过氧化氢对胰腺癌细胞的损伤作用;(2)URG11与Nrf2的表达呈正相关;(3)URG11通过Nrf2-Trx1途径促进HIF-1α的转录和翻译;(4)URG11通过Nrf2提高MDM2的启动子活性而促进MDM2表达。<br>　　结论:URG11通过激活Nrf2提高胰腺癌细胞的抗氧化能力和促进MDM2、HIF-1α的表达。<br>　　第四章 URG11-Nrf2信号通路在吉西他滨化疗耐药中的作用及机制研究<br>　　目的:研究抑制URG11的表达与胰腺癌对吉西他滨的化疗敏感性的关系及其机制。<br>　　方法:利用MTT法检测胰腺癌细胞对吉西他滨的敏感性;通过Western blot检测吉西他滨对胰腺癌细胞凋亡和周期的影响;结合RNAi探讨抑制URG11促进吉西他滨化疗敏感性的信号转导途径;通过胰腺癌荷瘤裸鼠实验研究抑制URG11联合吉西他滨的体内肿瘤治疗作用。<br>　　结果:(1)抑制URG11表达可提高胰腺癌对吉西他滨的化疗敏感性;(2)抑制URG11提高吉西他滨对胰腺癌的化疗效能;(3)抑制URG11促进吉西他滨对胰腺癌细胞凋亡和G1期阻滞的诱导效应;(4)抑制URG11促进吉西他滨的化疗敏感性，与Nrf2下调和ABCG2的表达受到抑制相关;(5)抑制URG11可提高吉西他滨对胰腺癌荷瘤裸鼠体内成瘤的抑制作用。<br>　　结论:抑制URG11的表达通过下调Nrf2及其下游信号通路可提高胰腺癌对吉西他滨的化疗敏感性。