摘要目的:<br> 白血病是一类造血干细胞的恶性克隆性疾病,又称“血癌”,该病居年轻人恶性疾病的首位。近年来,我国白血病的发病率正在持续上升。当前白血病的治疗方法主要是化疗。但严重的药物毒副反应及耐药,使其临床应用受到限制。近年来,中药因毒副作用小且疗效肯定等优势逐渐受到重视。因此,在中药中寻找白血病化疗辅助药物成为热点。20(s)-人参皂甙Rg3(20(S)-Ginsenoside Rg3,20(S)-GS-Rg3)是人参的生物活性成分,它是三萜皂甙混合物,具有多种生物活性,可用于预防和治疗胃癌、肺癌、肝癌、胰腺癌、卵巢癌和结肠癌等恶性肿瘤。本研究旨在探讨20(s)-人参皂甙Rg3诱导人白血病细胞U937、HL-60细胞凋亡的分子机制,为20(s)-人参皂甙Rg3治疗人白血病提供实验和理论依据。<br> 方法:<br> (1)采用台盼蓝染色检测细胞存活率;<br> (2)采用Annexin V FITC/PI双染流式细胞仪分析U937、HL-60细胞的凋亡率;<br> (3)采用Western blot技术检测P-和anti-P-Akt、mTOR、p70S6K、4E-BP1和GSK-3β等蛋白的表达;<br> (4)采用荧光分光光度计分析技术检测caspase-3、caspase-9活性。<br> 结果:<br> (1)台盼蓝染色结果显示:随着20(s)-人参皂甙Rg3浓度的增加及作用时间的延长,各实验组染成蓝色的细胞逐渐增多,提示坏死细胞逐渐增多,对照组则无变化。<br> (2)Annexin V FITC/PI双染流式细胞仪检测结果显示:U937、HL-60细胞凋亡百分率随着20(s)-人参皂甙Rg3作用时间的延长而升高。<br> (3)Western blot分析结果显示:随着20(s)-人参皂甙Rg3作用时间逐渐延长,P-Akt、P-mTOR、P-4E-BP1、P-GSK-3β、P-p70S6K蛋白的表达逐渐减弱且呈时间依赖性;而总的Akt、mTOR、4E-BP1、GSK-3β和p70S6K蛋白的表达不变。<br> (4)荧光分光光度计分析结果显示:随着20(S)-人参皂甙Rg3作用时间的延长,caspase-3、caspase-9活性逐渐增强。<br> 结论:<br> 20(S)-人参皂甙Rg3能够诱导U937、HL-60细胞凋亡,并具有时间及剂量依赖性,其作用机制与P-Akt、P-mTOR、P-4E-BP1、P-GSK-3β、P-p70S6K蛋白表达下调及caspase-3、caspase-9活性增强有关。
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