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摘要背景：<br>　　LYN是Src家族成员之一，是一种非受体蛋白酪氨酸激酶。除了T细胞以外，LYN基因在所有的血细胞中均有表达。最初LYN基因作为BCR信号通路的抑制剂被大家所熟知，但随后的研究显示LYN基因在多种细胞和信号通路中起不同的调节作用。PI3K-Akt信号通路可以通过多种类型的细胞刺激物激活，PI3K-Akt信号通路主要调节细胞的基本功能，如转录、翻译、增殖、存活和早期凋亡等。该信号通路受多种基因调控，如PTEN、SHIP等，而有研究显示，参与BCR信号通路的基因LYN基因在髓系白血病中参与调控PI3K-Akt信号通路。我们前期实验，在急性B淋巴细胞白血病细胞系BALL-1和B淋巴母细胞系HMy2中，通过用白血病相关转录因子PU.1筛选差异表达基因，发现LYN基因在急性B淋巴细胞白血病细胞系BALL-1中表达明显增高。因此，我们考虑在急性B淋巴细胞白血病中，LYN基因对PI3K-Akt信号通路是否起调控作用及该信号通路对BALL-1细胞的增殖和早期凋亡的影响。<br>　　目的：<br>　　1、在急性B淋巴细胞白血病细胞系BALL-1中LYN对PI3K-Akt信号通路是否有调控作用<br>　　2、抑制PI3K-Akt信号通路后对在急性B淋巴细胞白血病细胞系BALL-1细胞增殖和早期凋亡的影响。<br>　　方法：<br>　　一、细胞培养<br>　　BALL-1细胞系培养于高糖DMEM培养液（含10％小牛血清），置于37℃5％CO2的培养箱中培养。<br>　　二、siRNA干扰<br>　　溶解siRNA，用电转方法进行转染，沉默LYN基因。<br>　　三、PI3K抑制剂LY294002<br>　　取指数生长期细胞接种于96孔板中，次日加入LY294002，以相同体积的DMSO做对照。<br>　　四、Real-time PCR实验<br>　　分别取干扰后及抑制后的细胞，提取总RNA，进行RT-PCR后，进行Real-timePCR检测相关基因的mRNA表达水平。<br>　　五、Western blot<br>　　分别收集干扰后及抑制后细胞，提取细胞总蛋白，Western blot检测相关蛋白的表达情况。<br>　　六、CCK8方法<br>　　取指数生长期细胞接种于96孔细胞培养板中，24小时后转染siRNA片段。转染后，用CCK8方法检测小干扰片段干扰LYN后对BALL-1细胞增殖的影响。另取指数生长期细胞接种于96孔细胞培养板中，次日加入抑制剂，以相同体积的DMSO做对照，CCK8方法检测加入抑制剂后BALL-1细胞增殖情况。<br>　　七、流式<br>　　取指数生长期细胞接种于96孔细胞培养板中，24小时后转染siRNA片段。转染后，用流式细胞仪检测小干扰片段干扰LYN后对BALL-1细胞早期凋亡的影响。另取指数生长期细胞接种于96孔细胞培养板中，次日加入抑制剂，以相同体积的DMSO做对照，用流式细胞仪检测加入抑制剂后对BALL-1细胞早期凋亡的影响。<br>　　八、统计学分析<br>　　应用SPSS19.0统计软件进行数据处理，两组变量之间差异采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。<br>　　结果：<br>　　1、LYN-siRNA转染BALL-1细胞系后，LYN的mRNA水平及蛋白表达水平明显降低。<br>　　2、LYN-siRNA转染BALL-1细胞系后，Akt的mRNA水平及蛋白表达水平明显降低。<br>　　3、LYN-siRNA转染BALL-1细胞系后，细胞增殖数减少，细胞早期凋亡率增加。<br>　　4、在BALL-1细胞中加入PI3K抑制剂LY294002后，Akt的mRNA水平及蛋白表达水平明显降低。<br>　　5、在BALL-1细胞中加入PI3K抑制剂LY294002后，细胞增殖数减少，细胞早期凋亡率增加。<br>　　结论：<br>　　1、在急性B淋巴细胞白血病细胞系BALL-1中，LYN能够正向调控PI3K-Akt信号通路中Akt的表达。<br>　　2、在急性B淋巴细胞白血病细胞系BALL-1中，抑制PI3K-Akt信号通路表达后，抑制细胞增殖，促进细胞早期凋亡。