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红景天苷对PI3K/AKT/Gsk3-β介导的H9C2细胞缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究

摘要目的:研究红景天苷对H9C2细胞缺血再灌注损伤的保护作用和可能机制,为中医药在心肌缺血/再灌注损伤的防治中发挥更大的作用提供客观依据。<br>  方法:将H9C2细胞株接种至细胞培养瓶中培养,后取对数生长期细胞进行相关指标的检测。实验过程中,细胞分为以下4组:正常对照组(CON)组、缺氧/复氧组(I/R)组、缺氧/复氧+红景天苷(I/R+S)组、缺氧/复氧+红景天苷+LY294002(I/R+S+LY294002)组。①CON组:细胞置于37℃、21%O2、5%CO2的正常培养箱中孵育24h后进行相关指标检测;②I/R组:用缺氧培养液替换正常培养基(10%DMEM)后置于三气培养箱中培养16h后,把缺氧液换为10%DMEM置于正常培养箱中培养8h后,进行相关指标检测;③I/R+S组:在换缺氧培养液的同时加入20ul(200ug/ml)红景天苷组,余步骤同I/R组;④I/R+S+LY294002组:在I/R+S的基础上加入PI3K通道阻滞剂LY294002,阻滞剂在加红景天苷前30min加入,余步骤同I/R组。经上述处理后,用MTT法检测药物对细胞增殖的影响;检测培养液中活性氧(ROS)水平、细胞内外乳酸脱氢酶(LDH)含量来评估细胞的损伤程度;用WesternBlot法测定细胞内磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/糖原合成酶激酶-3(GSK3-β)蛋白表达水平和磷酸化状态。<br>  结果:1.MTT法检测抑制率组间比较:①I/R、I/R+S、I/R+S+LY294002三组抑制率均显著高于CON组(P<0.05);②I/R显著高于I/R+S组(P<0.05);③I/R+S组显著低于I/R+S+LY294002组(P<0.05)。<br>  2.LDH含量组间比较:①细胞外LDH含量I/R+S组显著低于I/R组(P<0.05),细胞内LDH含量则显著高于I/R组(P<0.05);②细胞外LDH含量I/R+S组显著低于I/R+S+LY294002组,细胞内LDH含量则显著高于I/R+S+LY294002组(P<0.05);③细胞外LDH含量I/R+S+LY294002组与I/R组无显著差异(P>0.05),细胞内LDH含量I/R+红景天苷+LY294002组略高于I/R组。<br>  3.ROS含量组间比较:①I/R+S组显著低于I/R组(P<0.05);②I/R+S组显著低于I/R+S+LY294002组(P<0.05);③I/R+S+LY294002组与I/R组ROS含量无显著差异(P>0.05)。<br>  4.Akt磷酸化(p-Akt)蛋白的表达组间比较:①I/R组与CON组比较有所增加,差异具统计学意义(P<0.05);②I/R+S组与I/R组相比,p-Akt明显增加(P<0.05);③I/R+S+LY294002组明显低于I/R+S组(P<0.05)。<br>  5.GSK3-β磷酸化(p-GSK3-β)蛋白表达组间比较:①I/R组与CON组比较有所增加,差异具统计学意义(P<0.05);②I/R+S组与I/R组比较p-GSK3-β明显增加(P<0.05);③I/R+S+LY294002组与I/R+S组比较,p-GSK3-β水平明显降低(P<0.05)。<br>  结论:红景天苷可通过抑制细胞凋亡、降低活性氧水平发挥对H9C2细胞缺血再灌注损伤的保护作用,该保护作用可能与PI3K/Akt/GSK3-β信号通路的激活有关。

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