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摘要背景：肾间质纤维化是所有慢性肾脏疾病发展至终末期肾脏病的重要环节之一，也是各种慢性肾脏疾病主要的病理学表现之一，故研究肾间质纤维化的形成机理及预防措施有重要意义。目前认为肾间质纤维化形成的可能机制:(1)细胞的受损和活化，肾脏受到致病因素（如高血糖、低氧、蛋白尿）的损伤以后，发生氧化应激反应，诱发炎症反应，释放炎性趋化因子，促使肾小管上皮细胞的活化、巨噬细胞及淋巴细胞浸润至肾间质和肾小管细胞的过度凋亡;(2)促/抑纤维化相关因子的释放，如CTGF、TGF-β1、AngⅡ、HGF、IL-1、TNF-α等;(3)上皮间充质转分化;(4)细胞外基质代谢异常，主要表现在基质蛋白合成增多，降解减少，基质蛋白过度沉积于肾间质。<br>　　目前大量研究表明EMT的过程有多种细胞因子及生长因子的参与，如CTGF、TGF-β1、PDGF等能促进EMT，而AngⅡ、HGF、BMP-7等则抑制EMT。治疗上现代医学目前缺乏有效可靠的方法，而中药防治肾间质纤维化具有相当的优势。补肾健脾活血解毒煎剂是导师在肾宁2号方基础上总结出，并根据临床兼杂症不同辨证加减治疗慢性肾衰竭患者取得了较好的疗效，主要药物组成有黄芪、制何首乌、制大黄、丹参、川芎、炒山楂、炒谷麦芽、山萸肉、苍术，是以补益脾肾为本，兼以解毒祛邪，活血化瘀的中药复方。根据慢性肾脏病的病机特点，中医认为正虚、毒浊、瘀血是导致慢性肾纤维化的重要病理因素，并制定为补脾益肾、祛湿泻浊、解毒活血为其治疗大法，为本次实验选用补益脾肾为本，兼以解毒祛邪，活血化瘀的补肾健脾活血解毒煎剂提供了坚实依据。<br>　　目的：本研究通过对服用补肾健脾活血解毒煎剂、缬沙坦及动物无菌饮用水的单侧输尿管结扎(UUO)大鼠的各组肾间质纤维化程度的研究，以明确补肾健脾活血解毒煎剂在延缓肾间质纤维化及保护肾功能中的作用。通过检测UUO大鼠血肌酐、尿素氮、尿β2-MG、尿NAG，观察肾组织病理变化，免疫组化法检测大鼠肾脏组织中α-平滑肌肌动蛋白(a-SMA)，转化生长因子-β1的表达，探讨补肾健脾活血解毒煎剂是否能通过调节TGF-β1及α-SMA表达，从而达到减轻肾间质纤维化，改善肾功能的作用。探讨补肾健脾活血解毒法在治疗肾小管间质纤维化中的作用，为临床上治疗慢性肾脏病的患者提供有效地治疗思路和依据。<br>　　方法：将50只SD大鼠适应性饲养一周后，随机分为五组，每组10只:假手术组，模型组，中药低剂量组，中药中剂量组，缬沙坦组。其中模型组，中药组及缬沙坦组造UUO大鼠模型:以5％水合氯醛(0.3ml/100g)腹腔注射麻醉大鼠后，使大鼠俯卧位固定在手术台，腰背部剃毛，消毒后铺无菌洞巾，在大鼠腰背部肋骨下缘脊椎左侧3-4cm处为切口，逐层切开皮肤、肌肉至腹腔，找到肾脏及左侧输尿管后再分离，组织钳托起左侧输尿管，用止血钳夹住两端，用4-0丝线在近肾盂段结扎，然后关腹。假手术组手术过程同上，差别在于进腹腔找到输尿管后仅分离不结扎。模型组予动物无菌饮用水10ml/kg/d，假手术组予动物无菌饮用水10ml/kg/d，中药低剂量组:予中药生药3.57g/kg/d(用药量相当于60 kg体重成人单位剂量)，中药中剂量组:予中药生药7.14g/kg/d(用药量相当于60kg体重成人单位剂量的2倍)缬沙坦组:予1mg/ml浓度缬沙坦溶液（无菌饮用水每日现配），7.3mg/kg/d，给药干预4周后，用代谢笼收集24h尿液，检测NAG及β2-MG;腹主动脉采血检测Scr、BUN;取梗阻侧肾组织常规固定、包埋、切片后，行苏木素伊红(HE)、马松三色(Masson)染色观察肾小管间质病变，免疫组化测α-SMA、TGF-β1在肾间质的阳性染色表达，应用图像分析软件(mage-pro Plus)进行半定量分析:实验数据均以均数±标准差（x±s）表示，各组间比较采用单因素方差分析，应用SPSS17统计分析软件对实验数据进行统计学处理，P＜0.05为有统计学意义，P＜0.01为有显著统计学意义。<br>　　结果：1.肾脏病理:肉眼观察:假手术组两侧肾脏颜色红褐色，表面光滑，形态大小正常。余四组梗阻侧肾脏体积明显增大，表面凹凸不平，肾皮质变薄，伴囊样改变，肾内积水明显，肾盂、肾盏扩张，肾乳头扁平。光镜观察:HE染色，假手术组肾皮质、髓质分界清楚，肾小球及肾小管形态大致正常;模型组可见肾皮、髓质分界欠清晰，肾单位结构绝大部分不正常，肾小球局灶硬化，肾小管可见蛋白管型，肾间质内多量炎症细胞浸润，散在小灶出血，间质纤维化明显。代文组肾皮、髓质分界清晰，肾单位结构正常，肾小球无明显异常改变，肾小管未见明显异常，肾间质内炎症细胞浸润，散在小灶出血。中药组的肾皮、髓质分界清晰，肾单位结构基本正常，肾小球无异常改变，个别肾小球部分硬化，肾小管偶见蛋白管型，肾间质内散在炎症细胞浸润，散在小灶出血，间质纤维化明显改善，效果较代文组相似。Masson染色:假手术组肾间质未见异常，模型组可见间质中存在大量蓝色条索样增生，肾小球病变不明显。中药组及代文组肾间质中蓝染胶原纤维条索样增生较A组均明显减轻(P＜0.01)，三个治疗组间比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。<br>　　2.免疫组化结果:假手术组大鼠肾组织中TGF-β1在肾小球内皮细胞、毛细血管内皮细胞和肾小管上皮细胞中微弱表达，呈胞浆阳性。模型组大鼠的肾间质细胞及近端肾小管可见TGF-β1广泛表达，与假手术组比较差异显著(P＜0.01)。与同期模型组相比，中药及代文组肾间质中TGF-β1的表达显著降低(P＜0.01)。α-SMA在各组的表达:假手术组的α-SMA在肾组织血管壁平滑肌细胞及血管外膜层细胞呈棕褐色颗粒样沉积，肾间质及肾小管上皮细胞未见明显着色。模型组可见平滑肌、肾间质、萎缩的肾小管周围有棕褐色颗粒沉积，呈粗条索状。中药及代文组皆可见棕褐色颗粒沉积在平滑肌及肾间质中，但程度较模型组明显减轻(P＜0.01)。<br>　　3.肾功能的变化:与假手术组相比，模型组、缬沙坦组、中药低剂量组、中药中剂量组Scr均升高明显(P＜0.05)，经中药及缬沙坦治疗后，治疗组与模型组相比Scr显著下降(P＜0.05)。与假手术组比较，模型组、缬沙坦组、中药低剂量组、中药中剂量组BUN均上升显著(P＜0.01)，治疗后与模型组比较，缬沙坦组、中药低剂量组、中药中剂量组均有明显下降(P＜0.01)。三个治疗组之间比较无明显差别(P＞0.05)。<br>　　4.尿NAG的变化:模型组、缬沙坦组、中药低剂量组、中药中剂量组尿NAG均明显高于假手术组，模型组明显高于缬沙坦组、中药低剂量组、中药中剂量组(P＜0.05)。<br>　　5.尿β2-MG的变化:模型组、缬沙坦组、中药低剂量组、中药中剂量组尿β2-MG均明显高于假手术组，模型组明显高于缬沙坦组、中药低剂量组、中药中剂量组(P＜0.01)。<br>　　结论：1.补肾健脾活血解毒煎剂能明显的降低血清尿素氮及肌酐，效果与缬沙坦无明显差别。<br>　　2.补肾健脾活血解毒煎剂能减低尿NAG酶及尿β2-MG。<br>　　3.单侧输尿管梗阻大鼠肾组织的肾皮、髓质分界欠清晰，肾单位结构绝大部分不正常，肾小球局灶硬化，肾小管可见蛋白管型，肾间质内多量炎症细胞浸润，散在小灶出血，间质纤维化明显;肾间质中TGF-β1、α-SMA的高表达。补肾健脾活血解毒煎剂与缬沙坦均可抑制UUO大鼠肾脏组织中TGF-β1的分泌，增加了ECM的降解，阻止肾小管上皮细胞转分化，减少α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达，且三个治疗组间差异无统计学意义，说明补肾健脾活血解毒煎剂治疗效果与缬沙坦相似，均有减轻肾脏纤维化作用，但中药剂量的高低之间无差异。<br>　　4.免疫组化结果显示:模型组大鼠的肾间质细胞及近端肾小管可见TGF-β1广泛表达，中药治疗组表达显著减少;模型组中α-SMA呈粗条索状沉积于平滑肌、肾间质、萎缩的肾小管周围。中药治疗后α-SMA在肾组织沉积明显减少，证实补肾健脾活血解毒煎剂能抑制肾小管间充质转分化，减少肌成纤维细胞收缩迁移能力，从而减少ECM的合成及分泌，减轻肾脏纤维化的病变程度。<br>　　5.在肾小管间质纤维化的过程中，随着间质纤维化面积的增加，BUN、Scr也在上升，两者呈正相关，提示肾功能损坏程度与间质纤维化程度相关，间质纤维化面积与TGF-β1、α-SMA的表达呈正相关，提示TGF-β1、α-SMA是纤维化的重要指标。