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摘要目的:本研究旨在通过生物信息学方法挖掘与前列腺癌甲基化相关的基因并探讨候选基因VWA1的甲基化状态与前列腺癌的关系。<br>　　方法:本研究采用生物信息学数据挖掘的方法对NCBI/GEO公共数据库的数据集进行分析并找到与原位前列腺癌甲基化和转移性前列腺癌甲基化相关的候选基因，并对TCGA数据库的前列腺甲基化数据分析以验证候选基因;用良性前列腺增生和前列腺癌的血液标本提取DNA进行甲基化位点测序检测实验(BSP)，检测各样本中VWA1的甲基化比例，并在相同样本的血液样本提取RNA，逆转录为cDNA后进行基因表达实时荧光定量PCR实验，检测VWA1基因的表达量，我们通过定量计算以相对表达量（（2-ΔΔCt）的平均值±标准偏差）来表示基因的表达情况。比较VWA1在同一个样本中启动子序列甲基化与该基因表达的关系，试图在血液中找到新的前列腺癌标记物。使用Excel进行数据存储，R语言3.0.1、SPSS16.0 for windows软件进行统计分析。<br>　　结果:1.生物信息学分析结果<br>　　(1)经筛选7套数据集符合纳入排除标准，被我们纳入研究范围。<br>　　(2)经过倍数变数法计算和表达数据校正后，与原位前列腺癌相关的候选基因有7个:CELSR2、DNTTIP2、IL12RB2、OMA1、OXCT2、PHC2和VWA1;与转移性前列腺癌相关的候选基因共6个:MYCBP、OMA1、PPT1、PRKACB、ST7L、TMEM39B。上述基因均存在有显著统计学意义的倍数变化值和P值。<br>　　(3)经表观遗传学数据库对上述13个基因筛选后未进行表观遗传学研究的基因有九个:MYCBP、PPT1、PRKACB、ST7L、TMEM39B、CELSR2、IL12RB2、PHC2和VWA1，经甲基化位点预测发现，PPT1基因潜在甲基化位点有1个，CELSR2基因潜在甲基化位点有5个，IL12RB2基因潜在甲基化位点有1个，VWA1基因潜在甲基化位点有2个。<br>　　综上所述，经筛选校正和预测后我们发现PPT1与转移性前列腺癌有关，CELSR2，IL12RB2和VWA1与原位前列腺癌有关。<br>　　2.TCGA数据库验证结果<br>　　候选基因VWA1甲基化水平具有显著性差异， P值为1.65E-11;对374个原发前列腺癌组织样本和52个前列腺正常组织样本的mRNA表达数据进行差异分析，结果显示VWA1基因的表达量有显著差异，P值为0.032。<br>　　3.实验验证结果<br>　　(1)甲基化位点测序实验结果<br>　　VWA1基因长度为503bp，包含82个CG位点。我们总共对12个样本进行了分析，前列腺癌血液样本中VWA1基因甲基化所占比例较高（均超过50％），良性前列腺增生血液样本中VWA1基因均较低（最高为40.4％）;经t检验分析前列腺癌组与良性前列腺增生组的甲基化比例有统计学差异(P=0.002)。<br>　　(2)基因表达荧光实时定量PCR实验结果<br>　　良性前列腺增生组织样本中基因VWA1的表达量均较高，而前列腺癌组织样本中的表达量相对较低;经t检验分析前列腺癌组与良性前列腺增生组基因VWA1的表达有统计学差异(P=0.014)。<br>　　综合上述两实验结果可知，基因VWA1甲基化所占比例高的样本中该基因表达量相对较低，而VWA1甲基化所占比例低的样本中该基因表达量相对较高;经SPSS软件线性相关分析，VWA1的甲基化状态与该基因的表达量呈负相关，相关系数(Pearson Correlation)为:-0.684(P值为0.014)。因此，从统计学上说VWA1基因的甲基化状态与前列腺癌相关。<br>　　结论: PPT1与转移性前列腺癌有关，CELSR2，IL12RB2和VWA1与原位前列腺癌有关。VWA1的甲基化状态可能与前列腺癌密切相关。