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摘要研究背景:<br>　　肠道缺血再灌注损伤是一种常见的病理生理过程，许多疾病的病程中都会不同程度地伴随缺血再灌注损伤，如肠系膜动脉栓塞、绞窄疝、充血性心力衰竭、严重创伤、失血性休克等，一些手术及临床操作也可能导致缺血再灌注损伤，如大血管手术、小肠移植、心肺流转术及血液透析等。急性肠缺血严重时可威胁到患者生命导致死亡，其死亡率约为60-80％，近年来肠缺血的发生呈不断增加的趋势，因此深入了解肠道缺血再灌注损伤的发生机制，有助于减轻缺血再灌注损伤。<br>　　肠道缺血再灌注损伤的发生机制目前不甚清楚，相关学者先后提出氧自由基损伤、白细胞黏附与血管内皮细胞损伤、炎症介质与细胞因子和细胞凋亡等一系列学说，而这些学说与缺血再灌注时NF-κB信号的激活从而导致各种损害因子的出现有着重要的联系，NF-κB是参与炎症基因（如黏附分子、细胞因子、酶等）表达、细胞凋亡、细胞增殖与分化、氧化应激反应等诸多生物过程的一种重要的核转录调节因子。肠黏膜屏障功能的损害包括缺血再灌注时各种炎症介质的释放所导致的肠黏膜上皮通透性增加，还包括缺血再灌注时肠上皮细胞间的紧密连接蛋白等物理屏障损害导致的细胞间隙增加，从而造成细菌及肠道的有害物质进入到血液中引起严重的全身炎症反应。<br>　　目的：本文就是围绕缺血再灌注时NF-κB信号激活及紧密连接蛋白破坏这一问题而展开研究的。<br>　　方法:<br>　　1.制作肠上皮细胞缺氧模型及大鼠肠缺血再灌注损伤模型，肠上皮细胞置于培养箱内缺氧培养6小时后(1％O2，5％CO2)，加入裂解液提取蛋白。1％戊巴比妥钠腹腔注射麻醉大鼠后，常规脱毛备皮后，取腹部正中切口，沿腹白线剪开腹膜，用血管夹夹闭肠系膜上动脉20分钟，松开血管夹恢复血管灌注1小时后处死大鼠，取上段空肠制作切片。Western-bolt、免疫荧光检测肠上皮细胞内的BMP信号通路的表达变化。<br>　　2.肠上皮细胞IEC-6接种至培养板内，加入外源性BMP2、BMP4蛋白刺激细胞，同时加入BMP信号通路特异性性拮抗剂noggin蛋白，并且大鼠腹腔内注射noggin蛋白预处理30分钟后再接受缺血再灌注损伤，Sham组及缺血再灌注组作为对照，Western-bolt、免疫荧光检测肠上皮细胞内NF-κB信号通路的表达变化。<br>　　3.RT-PCR检测肠上皮细胞外源性BMP2、BMP4及noggin蛋白刺激后，细胞内TNF-a、IL-6等炎症基因的表达变化水平。<br>　　4.Western-bolt检测外源性BMP2、BMP4对肠上皮细胞IEC-6内AKT信号及紧密连接蛋白occludin表达变化的影响。<br>　　结果:<br>　　1.肠上皮细胞缺氧培养6小时后，细胞内的BMP2、BMP4与对照组比较表达增加，受体BMPRⅠa、BMPRⅡ表达上调，同时免疫荧光实验观察到，肠绒毛内的BMP2、BMP4、BMPRⅠa、BMPRⅡ荧光信号在缺血再灌注后较Sham组明显增强。<br>　　2.外源性的BMP2、BMP4可直接激活肠上皮细胞内的NF-κB信号，免疫荧光实验观察到NF-κB发生磷酸化后转移至核内参与调控，而BMP信号通路的特异性拮抗剂noggin蛋白可部分逆转NF-κB向核内转移。动物模型内缺血再灌注组肠上皮细胞内NF-κB信号明显激活，而予noggin蛋白预处理30分钟组的大鼠NF-κB信号激活水平降低。<br>　　3.外源性BMP2、BMP4可诱导IEC-6细胞内的TNF-a、IL-6的表达，导致炎症介质的释放，noggin蛋白可减少TNF-a、IL-6的产生。<br>　　4.AKT信号在加入BMP2、BMP4刺激30分钟时磷酸化水平明显增加，细胞间紧密连接蛋白occludin在加入BMP2、BMP4培养24小时后，蛋白表达水平明显降低，BMP信号的特异性拮抗剂noggin蛋白及NF-κB通路的阻断剂PDTC都可阻止occludin蛋白的减少。<br>　　结论:<br>　　1.缺氧及缺氧再灌注条件下，肠上皮细胞内的BMP2、BMP4蛋白表达增加，受体BMPRⅠa、BMPRⅡ表达上调。在小肠绒毛组织内，BMP2及BMP4在绒毛顶端增加最明显，而基底及隐窝处增加较弱。<br>　　2.BMP2及BMP4可激活肠上皮细胞内的NF-κB信号，导致炎症介质TNF-a、IL-6释放，增加肠黏膜屏障的通透性。<br>　　3.BMP2及BMP4激活肠上皮细胞内AKT信号减少紧密连接蛋白occludin的表达，损害肠黏膜物理屏障的完整性。