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摘要研究背景及目的:<br>　　HPH是一种低氧所引起的慢性进行性疾病，主要有持续肺动脉压力升高、并伴有右心室肥大及肺血管结构改建等特点。在高原心脏病(High Altitude Heart Disease，HAHD)发病的过程中HPH所扮演的角色非常关键。HAHD作为慢性高原病患者重要的死亡原因，也是高原上的常见疾病。因此，HPH及其发病机制的探索一直是高原医学研究的重点与热点。由于HPH的发病机制尚不完全清楚，迄今尚缺乏有效的预防及治疗措施。以往研究发现，HPH的发生发展中炎症免疫反应发挥有重要作用，但具体机制仍有待完善。<br>　　Th17细胞是一类具有强大的致炎性的细胞，有研究表明，其在炎症反应中发挥了重要作用。Th17细胞隶属于CD4+T辅助细胞系，作为一种CD4+T辅助细胞的新亚型，它不同于Th1细胞和Th2细胞。低氧诱导因子(hypoxia-inducible factors，HIFs)是低氧反应的氧感知信号途径中的关键分子，能介导低氧性肺血管改建等多种低氧反应。HIF-1的上调与激活可促进幼稚T细胞(Na(i)ve T cell)向Th17细胞分化，抑制其向Treg分化。HIF-1通过STAT3途径，可直接激活Th17细胞的特异性转录因子维甲酸相关孤独受体（RORγt），并参与调控Th17的功能。<br>　　白介素-17(Interleukin-17)是Th17细胞的主要效应因子，促进炎症反应是IL-17的主要生物学效应。IL-17在促进T细胞活化、募集及活化中性粒细胞中具有重要作用，其次，IL-17还能刺激纤维细胞与成纤维细胞的增殖，以此来增加胶原沉积，介导组织炎症反应。近年来，多项研究表明，已在慢性阻塞性肺疾病(COPD)、哮喘(Asthma)等慢性炎症性疾病和多种自身免疫性疾病中发现了Th17细胞的身影，并在其中发挥着关键作用。<br>　　因此，本研究采用低压低氧暴露复制小鼠HPH模型，利用该动物模型，探讨低压低氧暴露后Th17细胞的变化特点及其与肺血管改建之间的关系。以更深一步揭示HPH及其发病机制，为寻求关键有效的HPH防治靶点提供线索和依据。<br>　　方法:<br>　　1.动物分组<br>　　雄性Balb/c小鼠50只，按低氧暴露时间差异随机分为5组，每组10只。低压低氧组小鼠分别置与模拟海拔6000m的低压舱内饲养3、7、14、28 d。常氧组即0d组，置常压常氧环境下饲养。动物常规饲养，实验前12h禁食，自由饮水。采用持续性低压低氧方法复制HPH模型，即低氧处理组小鼠置于低压氧舱内24h连续低压低氧处理不同时间后检测所需指标。<br>　　2.检测方法<br>　　于相应时间点通过心导管检测右室收缩压(RVSP)，随后快速处死取材，测量右心室重量(RVHI)指数;Masson染色肺组织石蜡切片，观察肺血管改建及细胞外基质沉积情况;流式细胞术检测脾脏组织及肺组织中Th17细胞(CD4+IL-17+RORγt+)所占比例变化;ELISA检测血清中IL-4、IL-6、IL-17水平及肺组织中IL-17水平变化;Western blot检测肺组织中RORγt蛋白表达情况;RT2-PCR检测肺组织RORγt的mRNA表达水平。<br>　　结果:<br>　　1.RVSP及RVHI的变化<br>　　RVSP及RVHI检测结果表明，低氧暴露7d、14d、28 d后小鼠右心室收缩压(RVSP)和右心肥厚指数(RVHI)明显高于对照组。差异显著且具有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)。<br>　　2.小鼠血清细胞因子的变化<br>　　ELISA检测结果显示，低压低氧后各组小鼠血清IL-4、IL-6水平较常氧对照组明显升高，其差异具有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。低压低氧7d、14 d、28 d组血清的IL-17水平与常氧对照组相比显著升高，且差异有统计学意义(P＜0.01)。<br>　　3.脾脏组织Th17细胞比例的变化<br>　　流式细胞术结果显示，在低氧诱导下，脾脏组织中IL-17+ RORγt+CD4+T细胞百分比随缺氧时间的增长呈上升趋势，14 d、28 d组与对照组差异显著且有统计学意义(P＜0.01)。<br>　　4.肺组织RORγt的mRNA水平<br>　　RT2-PCR结果显示，在低氧诱导下，肺组织中RORγt的mRNA表达明显升高，7d、14d、28 d组与常氧对照组相比有差异，差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。<br>　　5.肺组织IL-17水平<br>　　ELISA结果显示，低氧暴露14d、28 d组与对常氧照组相比，肺组织中IL-17水平显著升高，且差异有统计学意义（P＜0.01）。<br>　　6.肺组织RORγt蛋白水平表达升高<br>　　Western blot结果可以看出，低氧诱导下，肺组织中RORγt的蛋白表达水平升高，与对照组相比有差异且差异具有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。<br>　　7.肺组织Th17细胞比例的变化<br>　　流式细胞术结果显示，在低氧诱导下，肺组织中Th17细胞的水平明显呈上升趋势，与对照组相比显著升高，且差异具有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。<br>　　8.相关性分析<br>　　肺组织中RORγt的mRNA表达水平、IL-17表达量与心室收缩压、右室肥厚指数呈显著正相关。<br>　　结论:<br>　　1.低压低氧可使脾脏Na(i)ve T细胞向Th17分化。<br>　　2.肺组织中RORγt的mRNA表达水平及IL-17水平显著升高。提示低压低氧时肺组织中浸润的Th17细胞增多。<br>　　3.小鼠在模拟海拔6000 m低压低氧环境生存7d即可造成RVSP和数RVHI明显升高，肺血管周围沉积的胶原纤维增多。<br>　　4.低压低氧时浸润至肺组织的Th17细胞与肺血管改建及HPH的发生有关。