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人诱导多能干细胞体外扩增生成红系集落并构建红系祖细胞株的研究

摘要目的:<br>  通过与滋养层细胞共同培养的方式,添加诱导因子,诱导人诱导多能干细胞(hiPSCs)分化成为红系祖细胞,并构建稳定的红系祖细胞株。<br>  方法:<br>  1)在添加有诱导因子Flt-3、TPO、SCF、EPO、IL-3的培养体系中,与CF-1小鼠胚胎成纤维细胞共培养的条件下,诱导商品hiPSCs分化成为红系集落。<br>  2)传代诱导成功的红系集落构建稳定的红系祖细胞株,倒置显微镜观察细胞形态, MTT法检测细胞活性,流式细胞仪检测诱导细胞表面标志物,并与CD34+细胞诱导分化的红系祖细胞进行比较。<br>  结果:<br>  1.hiPSCs诱导构建的红系祖细胞株呈集落样生长,外观上与原代并无差异。CD34+细胞组诱导分化生成的红系祖细胞生长缓慢,细胞多散在呈悬浮状态生长,集落少见。<br>  2.瑞氏染色观察计数,hiPSCs诱导构建的红系祖细胞株为(72.20±6.24)%,CD34+细胞组的红系祖细胞(35.00%6.02)%,两组间比较,差异非常显著(P<0.01)。<br>  3.CD71-PE、CD235a-FITC流式阳性结果,hiPSCs诱导构建的红系祖细胞株CD71和CD235a阳性率分别为(85.09%4.14)%和(5.87±0.37)%,与原代的(93.52%1.59)%和(3.02±0.75)%相比有差异(P<0.05); CD34+细胞组的红系祖细胞CD71和CD235a阳性率分别为(23.47±1.77)%和(0.58±0.07)%,与原代的(84.22±3.66)%和(1.02%0.08)%相比差异非常明显(P<0.01)。两组红系祖细胞间CD71和CD235a阳性率差异显著(P<0.05)。<br>  结论:<br>  1.采用与基质细胞共培养,添加适宜的诱导因子组合的方法,诱导hiPSCs分化成为红系集落,并成功建立红系祖细胞株。<br>  2.与CD34+细胞来源的红系祖细胞相比较,hiPSCs分化而来的红系祖细胞株在表面标志继承性和遗传性状稳定性方面明显优于CD34+来源的细胞。

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