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摘要背景:<br>　　2型糖尿病(T2DM)是一种常见的内分泌代谢疾病，占糖尿病(DM)总发病率的90％～95％，是遗传和环境因素共同作用导致的复杂疾病。近年来，因环境及生活方式的改变，T2DM在我国呈爆发式增长，目前我国已成为糖尿病第一大国。胰岛素抵抗是T2DM发病的重要机制也是其重要特征。大量研究证实，肥胖与T2DM紧密相关，肥胖尤其是中心性肥胖是T2DM的独立重要危险因素。随着体脂的增加，肥胖患者通常表现为血浆瘦素水平升高，而血浆sLR（soluble leptin receptor，可溶性瘦素受体）水平显著降低的特点。瘦素由脂肪组织分泌，具有调节摄食、糖脂代谢及免疫炎症等诸多功能。sLR是人体血浆中结合瘦素的最主要血浆蛋白，调节瘦素的生物功能。多项研究显示，血浆sLR水平降低与肥胖T2DM患者血糖、低密度脂蛋白胆固醇、血压等代谢综合征指标升高呈负相关，经过手术、控制饮食、体育锻炼等措施降低体重后，血浆sLR水平显著升高，提示血浆sLR水平可能作为肥胖T2DM患者代谢状态改善的生化指征。我们前期采用二甲双胍干预高脂喂养的胰岛抵抗小鼠及初诊T2DM病人，均发现二甲双胍能显著上调血浆sLR的水平，但其机制尚未阐明。<br>　　已知，人体血浆sLR来源于膜型LR（leptin receptor，瘦素受体）胞外域水解脱落，人体中存在四种LR亚型，即LR-a、LR-b、LR-c及LR-d，它们均由同一基因(LR)编码，转录后经RNA差异剪接后生成。其中，LRb是传递瘦素信号的唯一全长型瘦素受体。小鼠体内还存在其他亚型的瘦素受体，如膜型LR-f及分泌型LR-e。已有报道，肝脏是瘦素受体表达量最高的外周组织器官，在调节血浆sLR水平中具有重要作用。此外，肾脏组织中也存在丰富的瘦素受体。对于水解LR的酶总体上了解较少。近期报道，ADAM10(A Disintegrin And Metalloproteinase10，解聚素样金属蛋白酶10)、ADAM17参与了LR的水解脱落过程，其中ADAM10起主要作用。但二甲双胍是否通过上调瘦素受体及其水解酶的基因表达上调sLR的水平，目前尚未见报道。为此，本研究通过观察二甲双胍对小鼠肝脏、肾脏组织瘦素受体总量(LRt)及四种主要膜型受体(LRa，LRb，LRc，LRd)的基因表达，同时观察该药物对解聚素样金属蛋白酶ADAM10及ADAM17的基因表达以及其蛋白水平的改变，拟初步阐明二甲双胍上调血浆可溶性瘦素受体的可能机制。<br>　　方法:<br>　　42只C57BL/6小鼠（6～8周龄，体重17.02±1.91g）用随机数字表法随机分为2组，分别给予正常饮食及高脂饮食喂养5月后，各组再以随机数字表法分为3亚组，分别给予蒸馏水及低剂量(50mg/kg.d)、高剂量(200mg/kg.d)二甲双胍灌胃（1次/天，共计15d），处死后取各组小鼠肝脏、肾脏组织存于-80℃冰箱[18]。剔除喂养过程中死亡小鼠，根据饮食和蒸馏水、二甲双胍剂量的不同处理共为6亚组，如下所示:正常饮食—蒸馏水组(CD-W，n=7);正常饮食—低剂量二甲双胍组(CD-LM，n=7);正常饮食—高剂量二甲双胍组(CD-HM，n=7);高脂饮食—蒸馏水组(HF-W，n=5);高脂饮食—低剂量二甲双胍组(HF-LM，n=6)，高脂饮食—高剂量二甲双胍组(HF-HM，n=7)。Q-PCR检测各小组肝脏、肾脏组织瘦素受体(LRt，LRa，LRb，LRc，LRd)及(ADAM10、ADAM17)的基因表达水平，Western-Blot检测各组肝脏、肾脏组织ADAM10、ADAM17蛋白表达水平。<br>　　结果:<br>　　1.二甲双胍能剂量依赖性上调肝脏组织瘦素受体基因的表达，而对肾脏组织瘦素受体基因的表达无显著影响。肝脏组织瘦素受体总量LRt mRNA的相对表达量分别为:CD组[CD-W vs CD-LM vs CD-HM,1.04±0.34 vs1.63±0.18 vs5.26±0.89(P＜0.01)];HF组[HF-W vs HF-LM vs HF-HM,2.25±0.10 vs4.96±0.88(P＜0.05) vs9.11±1.33(P＜0.01)]。<br>　　2.肝脏中受二甲双胍上调的膜型瘦素受体亚型主要是三种，即LRa{CD组[1.02±0.24 vs1.42±0.47 vs2.92±0.68(P＜0.05)];HF组[1.13±0.62 vs2.80±0.18(P＜0.05)vs6.04±1.00(P＜0.01)]}、LRc{CD组[1.00±0.06 vs1.02±0.13 vs1.97±0.25(P＜0.01)];HF组[0.97±0.12 vs2.60±0.18(P＜0.01) vs4.58±0.11(P＜0.01)]}、LRd{CD组[1.02±0.25vs0.69±0.27 vs2.48±0.15(P＜0.01)]; HF组[1.22±0.23 vs2.55±0.16(P＜0.01) vs4.82±0.03(P＜0.01)]}。<br>　　3.肝脏长型跨膜瘦素受体LRb mRNA在二甲双胍处理前后的CD组小鼠中并无显著变化（1.02±0.30 vs0.69±0.16 vs0.32±0.09），有趣的是，高剂量处理的HF组小鼠肝脏中，LRb mRNA明显上调[0.69±0.26 vs0.77±0.15 vs2.39±0.59(P＜0.01)]。<br>　　4.二甲双胍对肾脏组织中瘦素受体的mRNA表达无论在正常饮食组或高脂组均无显著影响LRt[CD组（1.06±0.43 vs1.03±0.32 vs0.85±0.08）;HF组（0.37±0.13 vs0.36±0.17 vs0.74±0.27）]，LRa[CD组（1.05±0.45 vs0.87±0.22 vs0.36±0.07）;HF组（0.56±0.21 vs0.57±0.23 vs0.57±0.08）]，LRb{CD组[1.00±0.15 vs0.58±0.16(P＜0.01)vs0.12±0.02(P＜0.01)];HF组（0.14±0.04 vs0.08±0.05 vs0.08±0.03）}，LRc[CD组（1.03±0.32 vs1.05±0.16 vs0.40±0.06）;HF组（0.69±0.25 vs0.67±0.21 vs0.48±0.14）]，LRd{CD组[1.11±0.52 vs0.79±0.18 vs0.44±0.14(P＜0.05)];HF组（0.28±0.07 vs0.21±0.04 vs0.67±0.13)｝。<br>　　5.二甲双胍对肝脏及肾脏组织中ADAM10的mRNA[肝脏:CD组（1.02±0.22vs1.06±0.14 vs0.76±0.10）;HF组（0.79±0.14 vs0.82±0.07 vs0.88±0.05）]{肾脏:CD组[1.01±0.17 vs0.95±0.16 vs0.56±0.16(P＜0.05)];HF组（0.38±0.19 vs0.23±0.04vs0.33±0.09）}、ADAM17[肝脏:CD组（1.00±0.01 vs1.07±0.07 vs0.85±0.09）;HF组（0.81±0.02 vs0.82±0.06 vs0.84±0.09）]{肾脏:CD组[1.02±0.29 vs1.00±0.08vs0.42±0.07(P＜0.05)];HF组（0.40±0.18 vs0.21±0.06 vs0.40±0.16）}及蛋白表达水平均无显著影响。<br>　　结论:<br>　　1、二甲双胍对肝脏组织的LR基因表达有上调作用，但对肾脏组织无此作用。<br>　　2、二甲双胍上调血浆sLR是通过上调肝脏组织LR基因表达实现的，但对产生sLR的水解酶ADAM10、ADAM17基因及蛋白的表达均无上调作用。<br>　　3、二甲双胍上调血浆sLR可能是通过促进小鼠肝脏组织短型跨膜瘦素受体，主要是LRa、LRc、LRd基因表达实现的。LRb对sLR不起主要作用，但LRb上调能调节瘦素功能。