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UHPLC-MS/MS法同时测定中药多种有效成分在大鼠体内的血药浓度及其药代动力学研究

摘要中药具有多组分和多靶点的特点,且其组分的含量和性质差异大,增加了中药作用机制研究的难度。UHPLC-MS/MS具有高分离效能、高通量、高灵敏度和特异性强的特点,且样品预处理简单、分析速度快,是中药有效成分分析和药代动力学研究的重要手段之一。本课题利用UHPLC-MS/MS技术,建立了同时测定中药复方制剂中多种组分在大鼠体内血药浓度的分析方法并初步研究其药代动力学行为,为了解中药的血药浓度变化提供参考,有助于阐明中药的药效机理,对中药的合理使用具有十分重要的意义。研究主要的内容及结果如下:<br>  1.建立了以延胡索乙素和芦丁为内标同时测定炎可宁胶囊中的黄柏碱、黄连碱、药根碱、小檗碱、巴马汀、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素和大黄素10种有效成分在大鼠体内血药浓度的UHPLC-MS/MS分析方法,并对灌胃给药后各组分的药动学行为进行初步研究。用700μL90%的无水乙醇-乙腈对血浆样品进行沉淀蛋白,流动相中的水相为含0.3%甲酸的超纯水,有机相为甲醇,以梯度进行洗脱,信息采集与定量使用多重反应监测模式,0.50、0.50、0.30、0.30、0.30、10、3.0、8.0、1.0、8.0μg·L-1分别为10种有效组分的定量下限,提取回收率在79.6%~113%,方法回收率在90.0%~109%,符合生物样品分析指导原则的要求。<br>  2.利用UHPLC-MS/MS技术,建立了采用表儿茶素和淫羊藿苷为内标同时测定小儿解表颗粒中酚酸类、黄酮类、色原酮类和木酯素类等14种有效成分在大鼠体内血药浓度及其药代动力学研究的分析方法。血浆样品经350μL90%的甲醇-无水乙醇沉淀蛋白,采用电喷雾电离(ESI)正负离子切换,多重反应监测模式进行定量测定,14种有效成分的定量下限分别为20、10、80、0.1、0.02、0.1、0.1、1.0、20、6.0、20、50、3.0、2.0μg·L-1,精密度高,稳定性好。该方法简便、快速,已成功用于小儿解表颗粒中14种组分在大鼠体内的血药浓度测定和药代动力学的研究。<br>  3.建立了以迷迭香酸和联苯双酯为内标同时测定健脑安神片中的原儿茶酸、原儿茶醛、绿原酸、咖啡酸、表儿茶素、芦丁、异绿原酸C、人参皂苷Re、肉桂酸、淫羊藿苷、人参皂苷Rb1、细叶远志皂苷、五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素16种有效成分在大鼠体内血药浓度的UHPLC-MS/MS分析方法,以水相为含0.1%甲酸的超纯水,有机相为乙腈,进行梯度洗脱,16种组分和2种内标在19 min内完全分离,各组分的定量下限分别为10、5.0、8.0、45、0.40、0.80、8.0、2.0、300、3.0、2.0、20、0.60、1.2、0.80、0.40μg·L-1,日内精密度和日间精密度的相对标准偏差(RSD)不大于7.0%。16种分析物的提取回收率在78.4%~102%,方法回收率在91.8%~108%。各组分在大鼠体内的血药浓度存在较大的个体差异。

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