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摘要乙烷基亚硝基脲(ENU)是一种人工合成的高效基因诱变剂，通过ENU诱导小鼠可获得大量的人类疾病动物模型，用于研究相关疾病的发生、发展机制以及对突变基因的功能研究。本文通过ENU诱变技术获得一例角膜混浊小鼠模型，并对其突变基因进行成功定位与鉴定，现汇报如下:<br>　　1、ENU诱变获得一例角膜混浊小鼠模型<br>　　ENU腹腔注射40只雄性C57BL/6J(B6)小鼠，待其恢复生殖能力后与同品系雌鼠配种，并对其后代进行筛选，获得多趾、小眼、短尾、瞳孔散大、角膜混浊等异常表型小鼠。本文以其中一例角膜混浊小鼠为研究对象，将该小鼠与正常B6小鼠配种，观察并记录63只后代，其中15只小鼠具有角膜混浊表型。组织学分析角膜混浊小鼠眼球发现，突变小鼠角膜基质层可见明显的新生血管，成纤维细胞明显增多，角膜上皮出现明显的角质层且通透性增加。<br>　　2、角膜混浊小鼠突变基因的定位<br>　　将B6背景角膜混浊小鼠与DBA(D2)小鼠配种获得F1代小鼠，再将F1代小鼠继续回交野生型B6小鼠获得[(B6×D2)F1×B6]N2代小鼠。筛选F1突变杂合子所生N2代小鼠612只，其中26只小鼠携带角膜混浊表型。突变基因连锁分析结果显示，突变基因与微卫星D12Mit285连锁（LOD值3.78），初步将该基因定位于12号染色体上。在此基础上继续选择可用的微卫星对该突变基因进行精确定位，最终将该突变基因定位于12号染色体9.04cM之内。<br>　　3、角膜混浊小鼠突变基因的鉴定<br>　　通过对突变基因定位区域内逐个基因功能的分析，发现与眼球发育相关4个候选基因:mycn、adam17、sdc1、osr1，故分别PCR或RT-PCR扩增候选目的基因，切胶回收后测序，将以上测序结果与本中心野生型B6小鼠基因序列进行对比，筛查突变位点。序列比对结果显示在mycn基因编码区1217bp处发生T到C的转换，导致MYCN蛋白编码区第406位氨基酸发生由V（缬氨酸）到A（丙氨酸）突变，该突变位于MYCN蛋白螺旋-环-螺旋结构域(bHLH)。<br>　　结论:本文获得一例角膜病小鼠模型，为相关疾病的研究提供动物模型。首次发现mycn基因突变可引起小鼠角膜混浊表型，但其机制不明，深入研究将丰富对mycn基因生物学功能的了解。