检索历史 清除

摘要目的:<br>　　Syndecan来自希腊文Syndein，意思将细胞微环境的成分与细胞骨架结合起来。它属于跨膜蛋白聚糖(proteoglycans，PGs)类细胞粘附分子，核心蛋白通过共价键连接4-7条糖氨聚糖侧链(glycosaminoglycan，GAG)。 Syndecan家族包括4个成员:Syndecan-1(SDC-1，CD-138)，-2，-3，-4。机体不同组织表达不同的Syndecan成员，具有不同的结构和功能。SDC-1和-4表达于多种细胞，包括上皮、内皮、血管平滑肌;SDC-2在培养的肺、皮肤纤维细胞中表达;SDC-3表达限于中央神经系统及外周神经。<br>　　Syndecans介导细胞—细胞和细胞—间质的粘附而影响细胞形态、细胞生长特征、细胞迁移、信号传导及血凝。这些生物效应被认为多由HS链介导，HS可连接许多配体，例如生长因子(GF)，细胞因子，细胞外基质(ECM)分子，蛋白酶，蛋白抑制剂等。通过与可溶性GF连接，syndecans作为低亲合力辅助受体，积聚配体并将之递呈给高亲合力受体[1]。SDC-1是syndecan家族中研究最多的成员，主要存在于上皮细胞并被广泛研究。通过HS链（结合于胞外域），SDC-1与许多ECM分子相结合（胶原，纤维结合蛋白，thrombospondin，tenascin等）。胞内域与肌动蛋白微细纤维有关，因此，SDC-1是一种间质固定者，将细胞结合于基质，而且通过HS链，SDC-1与FGFS结合且作为FGFS的辅助受体来影响细胞行为。<br>　　bFGF也叫FGF-2，是一种肝素结合GF的原型与syndecans连接，当通过syndecan的HS链定位于细胞间质时仍具活性[2]。bFGF与HS间的作用被认为会导致bFGF的双分子化，协助GF与FGF受体结合，从而受体双分子化，致使胞内信号传导体系被激活[3]。bFGF是一个多功能细胞分子，而在多种细胞和组织内发挥作用[4]，它是血管新生因素，可影响细胞迁移，在多个进化过程中是一个细胞分化因素。本实验是为了探讨FGF2/FGFR1，SDC-1在卵巢病变中的表达（蛋白水平和mRNA水平），FGF2对卵巢癌细胞生长的作用以及FGF2对卵巢癌细胞中SDC-1表达的影响，最终讨论FGF2/FGFR1，syndecan-1在上皮性卵巢癌的发生发展中的作用。<br>　　方法:<br>　　一、检测FGF-2/FGFR1在上皮性卵巢癌组织中的表达情况<br>　　应用免疫组化方法检测正常卵巢、良性卵巢瘤、卵巢交界瘤和上皮性卵巢癌原发灶以及其大网膜转移灶中FGF2/FGFR1的表达，应用RT-PCR检测组织中其mRNA表达水平。<br>　　二、检测FGF-2对SKOV3细胞株增殖的影响<br>　　培养SKOV3细胞，加入FGF2100pg/ml，FGF21ng/ml，FGF210ng/ml and10％FCS，应用trypan blue排除实验来评估细胞的增殖活力;在细胞中加入FGF-2100pg/ml，1ng/ml，10ng/ml和FGF2-NA100μg/ml，应用BrdU标记法来评估细胞DNA合成状况。应用SPSS13.0对结果进行统计分析，P＜0.05则差异存在统计学意义。<br>　　三、检测syndecan-1在上皮性卵巢癌组织中的表达情况<br>　　应用免疫组化方法检测正常卵巢、良性卵巢瘤、卵巢交界性囊腺瘤和上皮性卵巢癌原发灶以及其大网膜转移灶中syndecan-1的表达，应用RT-PCR检测其在组织中mRNA表达水平。<br>　　四、检测FGF-2对SKOV3细胞株中syndecan-1表达的影响<br>　　培养SK-OV-3细胞应用RT-PCR方法检测mRNA变化，加入FGF2及其中和抗体FGF2-NA，分析FGF2对syndecan-1 mRNA表达的影响，结果应用SPSS13.0进行统计学分析，P＜0.05有统计学意义。<br>　　结果:<br>　　1、FGF2及FGFR1表达情况:免疫组化:在原发灶:FGF2见于3例(10％)卵巢良性病变（1例巧囊，2例畸胎瘤），位于腺细胞胞浆，评分1-2;见于9例(36％)EOC(3例Ⅰ期，6例Ⅲ期)，评分2-3，位于胞浆，正常卵巢及交界性卵巢囊腺瘤未见FGF2表达。卵巢良性病变和EOC两组间FGF2的表达存在统计学差异;FGFR1见于2例(6.7％)卵巢良性病变（2例巧囊），评分1-2;见于8例(32％)EOC(2例Ⅰ期，6例Ⅲ期)，评分1-2，位于腺细胞胞浆，正常卵巢及交界性卵巢囊腺瘤未见FGFR1表达。卵巢良性病变和EOC两组间FGFR1的表达有统计学差异;在大网膜转移灶:FGF2见于4例EOC(stageⅢ)和1例卵巢交界性囊腺瘤，评分1-2，染色部位是腺细胞的胞浆。FGFR1见于9例EOC(stageⅢ)和1例卵巢交界性囊腺瘤，评分1-2，染色部位是腺细胞的胞浆;RT-PCR:良性卵巢瘤和EOC两组间FGF2/FGFR1的mRNA变化与免疫组化结果一致，即EOC组高表达，而且两组间的差异有统计学意义;细胞增殖实验:空白对照组的活细胞数是32100±3829/孔(48h)，39300±3750/孔(96h); FGF-2100pg/ml组的活细胞数是44600±5852/孔(48h)，68499±4421/孔(96h);FGF-21ng/ml组的活细胞数是71500±4705/孔(48h)，97499±2923/孔(96h);FGF-210ng/ml组的活细胞数是101000±6333/孔(48h)，139000±3306/孔(96h);10％FCS组的活细胞数是141000±4222/孔(48h)，181000±4212/孔(96h)。组间活细胞数存在统计学差异，P＜0.05; DNA合成实验:FGF-2100pg/ml组的BrdU标记值是1.6858±0.39914;FGF-21ng/ml组的BrdU标记值是3.2538±1.0332;FGF-210ng/ml组的BrdU标记值是4.1634±0.9850;10％FCS组的BrdU标记值是5.46±1.3756，FGF2-NA100μg/ml组的BrdU标记值是0.2782±0.1079，组间的BrdU标记值存在统计学差异，P＜0.05。<br>　　2、syndecan-1表达情况:免疫组化:卵巢病变原发灶中syndecan-1见于2例卵巢良性病变(6.7％)，（1例巧囊，1例畸胎瘤），位于腺细胞的胞膜和/或胞浆，评分1-2;见于1例卵巢交界性囊腺瘤(25％)，位于腺细胞的胞浆，评分1;见于8例(32％) EOC(stageⅢ)，其中7例染色位于腺细胞的胞膜和/或胞浆，2例染色位于间质，评分1-2，正常卵巢组织中未见表达。卵巢良性病变和EOC两组间SDC-1的表达存在统计学差异;卵巢癌大网膜转移灶中SDC-1见于8例EOC（1例Ⅳ期，7例Ⅲ期），其中4例是癌巢腺上皮细胞染色(+)，7例间质染色(+)，3例腺上皮和间质染色(+)，腺细胞染色评分2，间质染色评分2-3;RT-PCR:正常卵巢和交界囊腺瘤组织中SDC-1未见明确表达，良性瘤和EOC组间存在统计学差异，与免疫组化结果一致，即EOC组高表达，而且两组间的差异有统计学意义，P＜0.05;细胞培养:在10％FCS培养卵巢癌细胞株SK-OV-3，syndecan1中等表达(48h)，高表达(96h)，随着培养的时间呈现上扬趋势。当细胞中加入FGF2时，SDC-1表达受抑制，而且没有随着时间而发生变化。当细胞中加入FGF2-NA时，SDC-1呈中等强度表达，随着时间而减弱。<br>　　结论:<br>　　(1)FGF2在上皮性卵巢癌的增殖性生长中起到重要的促进作用，且呈剂量依赖模式，机制是诱导细胞的DNA合成。而其中和抗体FGF2-NA的应用可以抵消FGF2的促DNA合成效应，抑制细胞增殖，于是FGF2为我们提供了卵巢癌生物治疗的新靶点新思路，而中和性抗体的使用也许会成为一次有意义的尝试。<br>　　(2)syndecan-1作为细胞表面黏附分子，不仅协助FGF2以促进细胞增殖和血管新生，促进上皮性卵巢癌细胞的生长，而且很可能在上皮性卵巢癌的侵袭性生长和病灶转移中发挥作用。我们首次报导了上皮性卵巢癌原发灶及大网膜转移灶中的表达特点，统计分析表明SDC-1在上皮性卵巢癌中表达升高，主要是腺细胞的胞膜和胞浆，而且与其在组织中的mRNA变化一致，故我们认为其调节在转录前水平。同时我们发现了原发灶和转移灶中SDC-1表达的差异:在原发灶主要是腺细胞表达，而转移灶则主要是间质表达，提示间质中SDC-1的表达与卵巢癌的侵袭性生长与转移有一定关系。FGF-inducible response element（FiRE）是位于SDC-1启动子上游710 kb的一个长约280 bp的基因片段，受到生长因子作用而促进SDC-1的表达。在成纤维细胞中受到FGF-2的作用而使SDC-1的表达增强，但角质化细胞是受到EGF的作用而使SDC-1的表达增强，因此不同细胞中FiRE调节SDC-1表达的机制是不同的。而在本研究中FGF2导致SDC-1的mRNA表达下降，这说明上皮性卵巢癌细胞中SDC-1表达的调节不同于成纤维细胞，很可能是体内为环境中细胞因子的综合作用所致。