换一批
换一批摘要目的:构建小鼠Spag6L基因的真核表达质粒，并研究其在哺乳动物细胞内的表达与定位。构建上游启动子荧光素酶报告基因重组质粒，并检测其转录活性。<br> 方法:以小鼠的睾丸cDNA基因文库作为模版，PCR扩增Spag6L基因全长序列，测序正确后亚克隆至pEGFP-N2和pcDNA3真核表达载体中并酶切鉴定。将构建成功的重组表达质粒转染至COS-7与CHO细胞中，Western-blot法检测COS-7细胞中Spag6L蛋白表达，激光共聚焦扫描显微镜观察Spag6L蛋白在CHO细胞内的定位。构建上游启动子荧光素酶报告基因重组质粒Spag6L/PGL3，用双荧光素酶法检测其转录活性并与Spag6进行比较。<br> 结果:重组质粒Spag6L/pEGFP和Spag6L/pcDNA3经双酶切后产生的1.5kb的目的插入片段，经测序证实与Spag6L基因一致。GFP-Spag6L融合蛋白分子量为82kD，Spag6L蛋白分子质量为56kD。Spag6L蛋白在CHO细胞中主要定位于细胞质，以微管和囊泡表达为主。Spag6L上游启动子转录调节序列荧光素酶活性明显强于Spag6。<br> 结论:构建Spag6L/pEGFP、Spag6L/pcDNA3和Spag6L/PGL3重组质粒成功，为进一步探究Spag6L基因与Spag6基因的关系以及Spag6L基因在精子发生中的作用奠定了基础。
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