检索历史 清除

摘要RNA聚合酶Ⅱ(RNA PolⅡ)所参与的转录主要负责mRNA和一些非编码RNA的转录。RNA PolⅡ由12个亚基组成，其中最大的亚基Rpb1中有一个特殊的结构域CTD，它是由7个氨基酸YSPTSPS(Tyr-Ser-Pro-Thr-Ser-Pro-Ser)重复而成。在转录循环过程中，CTD结构域在S2、S5和S7位点发生动态的磷酸化和去磷酸化。PolⅡ参与的转录过程受到严密的调控，转录起始后的暂停是其中之一。转录暂停释放需要P-TEFb，细胞内的P-TEFb可以被Brd4募集，也可以超级延伸复合物(SEC)的形式募集。在SEC中，AF4/FMR2家族成员是支架蛋白，包括AFF1、AFF2、AFF3、AFF4四种，在不同细胞类型中出现不同组合。长久以来人们一直认为转录暂停释放进入延伸状态需要三个条件，即DSIF的磷酸化，NELF的磷酸化和CTD Ser2的磷酸化。但是本实验室在研究转录暂停释放过程中并没有发现Ser2的磷酸化过程，那么Ser2磷酸化究竟是如何发生的？其功能是什么？本论文通过过表达、敲低、qRT-PCR、染色质免疫共沉淀等分子生物学技术进行研究，结果发现:①Ser2磷酸化由(AFF4)SEC负责完成，并且Ser2磷酸化发生在转录暂停释放之后。②在AFF2和AFF4共存或者AFF3和AFF4共存的细胞中，AFF2、AFF3、AFF4对Ser2磷酸化具有功能性的冗余。⑨Ser2磷酸化对转录暂停释放是非必须的。④Ser2磷酸化对mRNA3'-末端剪切是必须的，Ser2磷酸化可以作为剪切因子募集的平台。这些发现纠正了人们对于转录暂停释放机制的理解，加深了对于Ser2磷酸化功能和机制的认识，对于进一步理解转录调控和mRNA3'-末端加工的关系有重要意义。