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沉默转录因子Sp3对胃癌细胞系功能的影响

摘要转录因子Sp3是转录因子Sp/KLF蛋白家族的一员,广泛存在于人体的各种组织细胞中,具有转录激活和转录抑制的双重调控作用。Sp3在多种肿瘤中高表达,参与多种肿瘤形成、增殖和凋亡等过程,但在胃癌细胞中的研究较少。TFF2是三叶因子家族中的一员,在胃和十二指肠黏膜表达。TFF2在胃癌组织中低表达甚至缺失,其表达水平与胃癌细胞的分化程度相关,是潜在的胃癌抑制基因。目前,关于TFF2在胃癌中的功能仍存在争议。因此,本文意在阐明TFF2和Sp3对胃癌细胞系功能的影响,并对二者的相互作用进行探讨。<br>  本课题研究中,我们将Sp3作为一个独立的因素来研究其在胃癌中的作用,同时也对TFF2的功能进行了相关研究。我们构建了干扰Sp3表达的质粒,并转染了BGC-823和SGC-7901两株胃癌细胞系,并筛选出稳转细胞株。利用稳转细胞株行MTT增殖实验、Transwell实验、划痕实检测胃癌细胞增殖、侵袭迁移以及Sp3对胃癌细胞周期的影响。结果表明Sp3具有促进细胞增殖、迁移侵袭的作用,并且能使细胞阻滞在G1期。其次,我们构建了TFF2-HA-pcDNA6.0的过表达TFF2质粒,转染BGC-823胃癌细胞株并筛选稳定过表达TFF2的细胞株。通过MTT实验检测TFF2对胃癌细胞增殖的影响;通过Transwell实验和划痕实验检测TFF2对胃癌细胞侵袭迁移的影响;我们还检测了过表达TFF2对细胞周期的影响。结果显示TFF2具有抑制细胞增殖,促进细胞侵袭迁移的作用,并且能使胃癌细胞阻滞在G1期。再次,我们检测了Sp3对迁移侵袭相关蛋白的影响。检测发现Sp3与TFF2在功能方面存在相互协同的方面,通过生物信息学方法认为二者存在相互结合的可能性。接着我们通过蛋白质免疫共沉淀实验,证明了TFF2和Sp3存在蛋白水平的结合关系。<br>  综上所述,TFF2具有抑制细胞增殖,促进细胞迁移侵袭的作用,并且能将胃癌细胞阻滞在G1期。Sp3具有促进细胞增殖、迁移侵袭的作用,并能将胃癌细胞阻滞在G1期。Sp3与TFF2在功能方面存在相互协同的方面,TFF2和SP3存在蛋白水平的结合关系。

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